इस कागज प्राथमिक विस्फोट दर्दनाक मस्तिष्क चोट के एक उपंयास मॉडल का वर्णन है । एक संपीड़ित हवा में संचालित सदमे ट्यूब के लिए इन विट्रो माउस हिप्पोकैम्पस स्लाइस संस्कृतियों में बेनकाब करने के लिए प्रयोग किया जाता है एक झटका लहर । यह एक सरल और तेजी से एक उच्च प्रवाह के साथ एक reproducible मस्तिष्क ऊतक चोट पैदा प्रोटोकॉल है ।
दर्दनाक मस्तिष्क चोट सैंय और नागरिक आबादी में मौत और विकलांगता का एक प्रमुख कारण है । विस्फोट के विस्फोटक उपकरणों के विस्फोट से दर्दनाक मस्तिष्क चोट के परिणाम, हालांकि, तंत्र है कि आबाद मस्तिष्क क्षति विस्फोट से अधिक दबाव जोखिम के परिणामस्वरूप पूरी तरह से समझ में नहीं आ रहे है और मस्तिष्क की चोट के इस प्रकार के लिए अद्वितीय माना जाता है । नैदानिक मॉडल महत्वपूर्ण उपकरण है कि बेहतर विस्फोट प्रेरित मस्तिष्क चोट को समझने में योगदान कर रहे हैं । इन विट्रो ब्लास्ट TBI मॉडल में एक उपन्यास वास्तविक जीवन खुला क्षेत्र विस्फोट तरंगों Friedlander तरंग द्वारा मॉडलिंग अनुकरण करने के लिए एक खुला समाप्त सदमे ट्यूब का उपयोग कर विकसित किया गया था । C57BL/6N माउस organotypic हिप्पोकैम्पस स्लाइस संस्कृतियों एक सदमे तरंगों को उजागर और चोट के विकास के लिए ७२ ज propidium आयोडाइड, कोशिका क्षति के एक अच्छी तरह से स्थापित फ्लोरोसेंट मार्कर का उपयोग कर रहे थे कि केवल कोशिकाओं के साथ प्रवेश सेलुलर झिल्ली समझौता । Propidium आयोडाइड प्रतिदीप्ति एक विस्फोट की लहर से अवगत कराया स्लाइस में काफी अधिक था जब इस प्रोटोकॉल की अवधि भर में अन्तर्वासना स्लाइस की तुलना में । मस्तिष्क ऊतक चोट बहुत reproducible और सदमे लहर लागू की चोटी के दबाव के लिए आनुपातिक है ।
विस्फोट दर्दनाक मस्तिष्क चोट (TBI) विस्फोटक उपकरणों के विस्फोट से परिणाम है कि मस्तिष्क की चोट का एक जटिल प्रकार है1,2. ब्लास्ट TBI इराक और अफगानिस्तान में हाल ही में हुए सैन्य संघर्षों के साथ पिछले 15 सालों में एक प्रमुख स्वास्थ्य मुद्दे के रूप में उभरा है2,3. कुल मिलाकर, यह अनुमान है कि ४.४% और इराक और अफगानिस्तान से लौट रहे सैनिकों के २२.८% के बीच हल्के TBI, इन जा रहा है विस्फोट से संबंधित की एक बड़ी संख्या का सामना करना पड़ा है, अमेरिकी बलों में विस्फोट TBI के एक उच्च दर की सूचना के साथ ब्रिटेन बलों के साथ तुलना में4 ,5.
तात्कालिक विस्फोटक उपकरणों का उपयोग विस्फोट से जुड़े आघात के अधिकांश के लिए जिंमेदार है, ब्लास्ट TBI सहित, सैंय बलों6द्वारा सहा । एक विस्फोटक आरोप के एक बहुत तेजी से परिणाम में विस्फोट-लेकिन क्षणिक-दबाव में वृद्धि, मिसे में होने वाली । एक वास्तविक जीवन मुक्त क्षेत्र विस्फोट से परिणामस्वरूप अधिक दबाव लहर Friedlander समारोह द्वारा मॉडलिंग की है, चोटी एक घातीय क्षय7,8द्वारा पीछा करने के लिए अचानक वृद्धि के साथ । चरम बलों की सीमा और उनके तेजी से समय एक विस्फोट घटना में देखा पाठ्यक्रम आमतौर पर गैर में अनुभव नहीं कर रहे है विस्फोट1,9आघात । तरंग की अधिकतम दबाव है, जो पीक अधिक दबाव, और सकारात्मक लहर की अवधि के लिए मस्तिष्क की चोट विस्फोट और इन विस्फोटक आरोप और विस्फोट से दूरी10पर निर्भर करने के लिए महत्वपूर्ण योगदानकर्ताओं माना जा रहा है, 11.
आघात है कि एक विस्फोटक विस्फोट से परिणाम चार असतत घटकों, प्राथमिक, माध्यमिक, तृतीया और चतुर्धातुक विस्फोट चोट10,12,13,14के रूप में नामित के रूप में वर्गीकृत किया गया है । इन घटकों में से प्रत्येक चोट के विशिष्ट तंत्र के साथ जुड़ा हुआ है । प्राथमिक विस्फोट चोट अंगों और ऊतकों पर अधिक दबाव लहर के प्रत्यक्ष कार्रवाई से परिणाम2,13. द्वितीयक विस्फोट चोट टुकड़े फेंकने के प्रभाव से परिणाम, मर्मज्ञ और गैर-मर्मज्ञ घाव2,15के कारण । तृतीयक विस्फोट चोट तब होती है जब शिकार के शरीर जमीन या आसपास की वस्तुओं के खिलाफ विस्थापित है और त्वरण/मंदी बलों1,10,13के साथ जुड़ा हुआ है । चतुर्धातुक विस्फोट चोट सीधे पहले तीन चोट तंत्र द्वारा कवर नहीं विस्फोट से संबंधित चोटों के एक विषम समूह का वर्णन12,13वर्णित है । यह शामिल है (लेकिन सीमित नहीं है) थर्मल चोट, धुआं साँस लेना, विकिरण, विद्युत चुम्बकीय तरंगों, और प्रतिकूल मनोवैज्ञानिक प्रभाव13,15. सबसे विस्फोट से जुड़े TBI चोट के पहले तीन तंत्र से सीधे परिणाम है, जबकि विस्फोट की चोट के चतुर्धातुक तंत्र आम तौर पर प्रणालीगत चोट13के साथ जुड़े रहे हैं । त्वरण/मंदी बलों के प्रभाव (जैसे, whiplash), कुंद और मर्मज्ञ दर्दनाक मस्तिष्क चोट बड़े पैमाने पर TBI के अंय प्रकार के संबंध में अध्ययन किया गया है (जैसे, मोटर वाहन दुर्घटनाओं, गिरता है, बैलिस्टिक चोट) । हालांकि, प्राथमिक विस्फोट अधिक दबाव लहर चोट विस्फोट और मस्तिष्क के ऊतकों पर इसके प्रभाव के लिए अद्वितीय है बहुत कम अच्छी तरह से16समझ रहे हैं । प्राथमिक विस्फोट चोट तंत्र, एक दबाव लहर के साथ जुड़े, यांत्रिक बलों के पहले मस्तिष्क के साथ बातचीत कर रहे हैं ।
कई नैदानिक TBI मॉडल पिछले दशकों है कि चोट और pathophysiology के विस्फोट TBI तंत्र को समझने के लिए अमूल्य गया है और संभावित नए उपचार है, जो अंयथा करने के लिए विशेष रूप से असंभव हो जाएगा की जांच पर विकसित किया गया है नैदानिक सेटिंग में17,18,19. हालांकि कोई एकल नैदानिक मॉडल नैदानिक विस्फोट मस्तिष्क आघात की जटिलता को पुन: पेश कर सकते हैं, आम तौर पर अलग नैदानिक TBI मॉडल मानव TBI के विशिष्ट पहलुओं को दोहराने । एक विस्फोट विस्फोट के साथ जुड़े बलों की हानिकारक कार्रवाई अलगाव में या दोनों में इन विट्रो में और vivo ब्लास्ट TBI मॉडल में संयोजन में अध्ययन किया जा सकता है । इन विट्रो मॉडल में प्रयोगात्मक पर्यावरण (ऊतक शारीरिक स्थितियों और चोट जैव यांत्रिकी), जो जैविक परिवर्तनशीलता को कम कर देता है और reproducibility में सुधार के एक तंग नियंत्रण की अनुमति का लाभ है, के अध्ययन की अनुमति पशु मॉडल20में मौजूद संस्थापकों के बिना विशिष्ट आणविक कैस्केडिंग । हमारा लक्ष्य एक इन विट्रो मॉडल मस्तिष्क ऊतक पर प्राथमिक विस्फोट के प्रभाव की जांच करने के लिए विकसित करने के लिए किया गया था । हम ऐसी है कि एक तात्कालिक विस्फोटक डिवाइस (आईईडी) द्वारा उत्पादित के रूप में एक मुक्त क्षेत्र विस्फोट की एक Friedlander तरंग प्रतिनिधि के साथ एक सुपरसोनिक shockwave के साथ एक मॉडल विकसित करने के उद्देश्य से ।
विस्फोट TBI (प्राथमिक, माध्यमिक और तृतीयक ब्लास्ट चोट तंत्र) के साथ जुड़े चोट के सभी तंत्र के अलावा, प्राथमिक विस्फोट चोट आघात विस्फोट करने के लिए अद्वितीय है और यह विस्फोट से संबंधित1,2 तंत्र की कम से समझ है . उपंयास प्रोटोकॉल यहां वर्णित प्राथमिक विस्फोट TBI का अध्ययन करने के लिए एक खुली समाप्त सदमे ट्यूब का उपयोग करने के लिए इन विट्रो माउस हिप्पोकैम्पस टुकड़ा संस्कृतियों एक सदमे की लहर के लिए एक सरल और तेजी से प्रोटोकॉल है कि एक reproducible के निर्माण की अनुमति देता है का उपयोग कर विकसित किया गया था एक उच्च प्रवाह के साथ प्राथमिक विस्फोट TBI ।
इन विट्रो में पहले प्राथमिक विस्फोट TBI मॉडल26,27कोशिकाओं को हीड्रास्टाटिक दबाव तरंगों लागू । हालांकि, दबाव उत्पादन मॉडल नहीं था Friedlander समारोह एक हीड्रास्टाटिक दबाव पल्स की अवधि के रूप में बहुत हवाई विस्फोट से अधिक लंबे समय तक था दबाव लहरें13. विशेषता Friedlander समारोह एक सदमे ट्यूब1,8का उपयोग कर प्रयोगशाला में आसानी से मॉडलिंग की जा सकती है । सदमे ट्यूब एक पारंपरिक प्रयोगशाला वातावरण में वास्तविक जीवन खुला क्षेत्र विस्फोट अनुकरण कि सदमे तरंगों का उत्पादन कर सकते हैं, इस तरह के चोटी के दबाव के रूप में तरंग मापदंडों, की सटीक नियंत्रण की अनुमति, सकारात्मक लहर अवधि और आवेग, अलग से डायाफ्राम सामग्री और मोटाई, और चालक मात्रा8,28,29।
सरल इन विट्रो मॉडल जैसे सेल संस्कृतियों आमतौर पर सेल प्रकार और synaptic कनेक्टिविटी30के विविधता की कमी है । हाल ही में, इन विट्रो में ब्लास्ट का असर ब्रेन सेल ‘ spheroids ‘ के विभिन्न सेल प्रकारों को शामिल करते हुए31जांच की गई है. इन रोचक तैयारी की आगे की जांच योग्यता है; हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है कि कैसे उनके सेलुलर संगठन और कनेक्टिविटी बरकरार मस्तिष्क दर्पण । OHSC एक अच्छी तरह से स्थापित इन विट्रो प्रयोगात्मक मॉडल23,३२, संस्कृति के लिए आसान कर रहे हैं और उनके तीन आयामी ऊतक cytoarchitecture, कोशिका भेदभाव और synaptic कनेक्टिविटी अच्छी तरह से संरक्षित कर रहे हैं और बहुत इसी तरह वीवो में३३,३४,३५,३६। OHSCs सेल संस्कृति और vivo मॉडल23,३२ में एक के बीच जटिलता के एक मध्यवर्ती स्तर का प्रतिनिधित्व करते हैं । OHSCs इन विट्रो रोग neurodegenerative में vivo मॉडल में देखा गया है और बहुत ही उपयोगी है संभावित न्यूरोप्रोटेक्टिव दवाओं की स्क्रीनिंग में और उनके तंत्र को समझने में पुन: पेश करने के लिए प्रदर्शन किया गया है कार्रवाई17,21,22,३७,३८। अंत में, शारीरिक क्षेत्र का अध्ययन किया, हिप्पोकैम्पस, शोधों TBI अध्ययनों में अत्यधिक प्रासंगिक है, क्योंकि यह क्षेत्र अक्सर TBI रोगियों३९,४०,४१में क्षतिग्रस्त हो जाता है । OHSC मॉडल विस्फोट TBI28,४२,४३,४४के लिए इस्तेमाल किया गया है, तथापि, हमारे मॉडल अपेक्षाकृत सरल है और या तो क्षैतिज या ऊर्ध्वाधर में मौजूदा सदमे ट्यूब के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जटिल रूपांतरों के बिना विन्यास ।
OHSC कई दिनों के लिए संस्कृति में रखा जा सकता है, जो समय३४के साथ जैविक प्रक्रियाओं की जांच की सुविधा । इस मॉडल में, ऊतक चोट है कि सदमे लहर जोखिम से हुई दैनिक तीन दिनों में मापा गया था, विस्फोट propidium आयोडाइड, सेल क्षति की एक अच्छी तरह से स्थापित मार्कर का उपयोग कर जोखिम के बाद । Propidium आयोडाइड एक विषैला उच्च ध्रुवीय डाई कि समझौता सेलुलर झिल्ली, जहां यह न्यूक्लिक एसिड को बांध और एक विशेषता चमकदार लाल प्रतिदीप्ति24,25,४५के साथ कोशिकाओं में प्रवेश है । प्रतिदीप्ति propidium आयोडाइड के साथ मापा घायल सेल Nissl धुंधला४६,४७का उपयोग कर गिनती के साथ एक अच्छा संबंध है दिखाया गया है ।
यह देखते हुए कि इस मॉडल में उत्पादित चोट फैलाना (चित्रा 2c) था, पूरे टुकड़ा के प्रतिदीप्ति जब विश्लेषण, अंय मस्तिष्क चोट मानदंड में पहले प्रकाशित काम के समान प्रदर्शन कर मापा गया था21,22 , के बजाय विशिष्ट क्षेत्रों का उपयोग कर के, के रूप में अंय इन विट्रो ब्लास्ट TBI मॉडल में किया गया है28,४३,४४,४८। वैश्विक दृष्टिकोण इस लेख में वर्णित मॉडल में इस्तेमाल भी संभावित परिवर्तनशीलता है कि जब ब्याज की परिभाषित क्षेत्रों रूपरेखा और विस्फोट से संबंधित चोट की एक और अधिक व्यापक तस्वीर प्रदान करता है पेश किया है समाप्त । दोनों सदमे लहर पीक दबाव, ५० केपीए और ५५ केपीए, भरपुर उत्पादन (पी < 0.05 और पी < 0.0001, क्रमशः) चोट जब अन्तर्वासना स्लाइस की तुलना में (चित्रा 2बी) । के रूप में प्रत्याशित, उच्चतम शिखर दबाव, ५५ केपीए के साथ सदमे की लहर, ५० केपीए वेव से अधिक चोट का उत्पादन किया । में एक इन विट्रो में अलग मस्तिष्क ऊतक के साथ मॉडल सीधे एक shockwave के संपर्क में, कैसे करने के लिए सही पैमाने पर पूरे जीव या एक इंसान सीधा नहीं है. फिर भी, आश्चर्य हम इस्तेमाल पीक क्षेत्र में मनाया दबाव की सीमा के भीतर हैं, आमतौर पर 50-1000 केपीए8,४९।
आदेश में शारीरिक तापमान और ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड के स्तर को उजागर OHSC बनाए रखने के लिए, जबकि यह सुनिश्चित करना है कि वे सदमे लहर जोखिम प्रोटोकॉल भर में संदूषण से मुक्त थे, ऊतक संस्कृति आवेषण बाँझ में बंद कर दिया गया एक अपूतित तकनीक के बाद पॉलीथीन बैग, प्रयोगात्मक मध्यम में जलमग्न ३७ ° c को गर्म और हौसले से ९५% ऑक्सीजन और 5% कार्बन डाइऑक्साइड, इसी तरह से पहले प्रकाशित काम के साथ bubbled28,४३,४४ ,४८. इन मॉडलों के विपरीत जहां जटिल उपकरणों के झटके लहर जोखिम के दौरान बाँझ बैग पकड़ करते थे, इस प्रोटोकॉल में, एक सरल और तेजी से विधि सदमे ट्यूब आउटलेट के सामने OHSC ऊतक संस्कृति आवेषण निलंबित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था (आंकड़ा 1a, सी ). इस पत्र में वर्णित मॉडल तेजी से प्रसंस्करण और उच्च प्रवाह, जबकि हाइपोथर्मिया के जोखिम को कम करने की अनुमति देता है । इन पहलुओं neuroprotection अध्ययनों के लिए विशेष रूप से प्रासंगिक है कि कुछ चिकित्सीय हस्तक्षेप TBI के बाद संभावित आवेदन की एक बहुत ही सीमित समय खिड़की हो सकता है । इस उपंयास सदमे लहर जोखिम प्रोटोकॉल 6 से 9 ऊतक संस्कृति आवेषण (आमतौर पर ३६ के लिए ५४ हिप्पोकैम्पस organotypic ऊतक स्लाइसें) की अनुमति देता है समय की एक छोटी अंतराल में एक सदमे की लहर से अवगत कराया (लगभग 1 ज) ।
OHSCs भर अच्छा अपूतित तकनीक की आवश्यकता है । यह संवर्धन भर में एक अपूतित लामिना प्रवाह हुड का उपयोग करें और जब विस्फोट के लिए बाँझ बैग को स्थानांतरित करने के लिए महत्वपूर्ण है । आदेश में 6 के ढक्कन के साथ अपूतित शर्तों के तहत स्लाइस इमेजिंग बाहर ले जाने के लिए जगह में अच्छी तरह से प्लेटें, हम कस्टम धातु के छल्ले का उपयोग करने माइक्रोस्कोप के फोकल विमान के लिए सेल संस्कृति आवेषण बढ़ा । हमारे प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है कि हम हर प्रयोग में घायल अन्तर्वासना स्लाइस शामिल हैं । अन्तर्वासना स्लाइस करने वाले अपवादों के साथ स्लाइस ब्लास्ट करने के लिए हूबहू इलाज किया जाता है जिससे शॉक-ट्यूब नहीं निकाली जाती; एक और महत्वपूर्ण कदम यह है कि सभी स्लाइस चोट या शम उपचार से पहले 1 ज imaged कर रहे हैं, यह सुनिश्चित करने के लिए कि इस्तेमाल किया स्लाइस की जनसंख्या के स्वास्थ्य समान है (आंकड़ा 2 बी) ।
समय के साथ स्लाइस में कोशिका चोट को बढ़ाता है के अलावा, ऊतक पारंपरिक immunohistochemistry५०के लिए प्रयोग के अंत में तय किया जा सकता है । हम विकसित और माउस हिप्पोकैम्पस स्लाइस का उपयोग कर विधि का मूल्यांकन किया । हालांकि, हमारी तकनीक को आसानी से अंय ऊतक कि संस्कृति में विकसित किया जा सकता है, ऐसे रीढ़ की हड्डी, रेटिना, फेफड़े या उपकला ऊतक के रूप में उपयोग अनुकूलित किया जा सकता है । इस अखबार और मॉडल के साथ हमारे पिछले काम में, हम केवल एक ही विस्फोट करने के लिए जोखिम के प्रभाव की जांच की । हालांकि, मॉडल अच्छी तरह से मस्तिष्क या अंय ऊतकों पर दोहराया कम स्तर के विस्फोटों के प्रभाव की जांच करने के लिए अनुकूल होगा । OHSCs कई हफ्तों या महीनों के लिए संस्कृति में रखा जा सकता है, पुराने प्रभाव की अनुमति की जांच की जा ।
इन विट्रो मॉडल में , विवो मॉडल की तुलना में सरल किया जा रहा है, एक उच्च प्रवाह है, कम खर्चीले हैं और प्रयोगों आमतौर पर एक कम समय पैमाने17पर पूरा किया जा सकता है. हालांकि, इन विट्रो मॉडल में का उपयोग कर प्राप्त परिणामों को पशु मॉडलों में के रूप में मांय किया जाना चाहिए इन विट्रो प्रसंस्कृत ऊतकों एक कृत्रिम वातावरण में रखा जाता है और क्या वे vivo17में होगा से अलग चोट का जवाब हो सकता है । बहरहाल, इन विट्रो मॉडल में बहुत मूल्यवान है मस्तिष्क चोट झरने की हमारी समझ को बढ़ाने में और न्यूरोप्रोटेक्टिव दवाओं स्क्रीनिंग में अधिक जटिल के उपयोग से पहले vivo मॉडल17,22 , ५१ , ५२. इस मॉडल द्वारा की पेशकश की कई फायदों के बावजूद, यह महत्वपूर्ण है कि इन विट्रो मॉडल में जानवरों में और vivo मॉडल में वर्तमान TBI की प्रमुख विशेषताओं की कमी है, जैसे संवहनी प्रणाली पर प्रभाव, बढ़ी हुई intracranial दबाव, प्रणालीगत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और कार्यात्मक व्यवहार हानि, जो करने के लिए पूरे जानवर में इन विट्रो मॉडल में पाया परिणाम को मांय करने की आवश्यकता पर प्रकाश डाला गया । फिर भी, इन विट्रो मॉडल के रूप में इस पत्र में वर्णित मॉडल अत्यंत उपयोगी अनुवाद प्रासंगिक वैज्ञानिक उपकरण हैं ।
अंत में, इस काम का वर्णन एक सरल और सीधा उपंयास विधि जहां माउस organotypic हिप्पोकैम्पस ऊतक संस्कृतियों कसकर नियंत्रित और reproducible वास्तविक जीवन प्रासंगिक सदमे तरंगों को एक प्रयोगशाला सदमे ट्यूब का उपयोग कर उजागर कर रहे हैं । परिणामस्वरूप वैश्विक चोट है, जो propidium आयोडाइड, कोशिका क्षति की एक अच्छी तरह से स्थापित मार्कर का उपयोग कर quantified था, बहुत reproducible है और लागू सदमे तरंगों के शिखर दबाव के लिए आनुपातिक है ।
The authors have nothing to disclose.
द्वारा समर्थित: रॉयल सेंटर फॉर डिफेंस मेडिसिन, बर्मिंघम, यूनाइटेड किंगडम, रॉयल ब्रिटिश सेना केंद्र ब्लास्ट इंजरी अध्ययन के लिए, इंपीरियल कॉलेज लंदन, यूनाइटेड किंगडम । आयुर्विज्ञान अनुसंधान परिषद्, लंदन, युनाइटेड किंग्डम (MC_PC_13064; श्री N027736/ गैस सुरक्षा ट्रस्ट, लंदन, यूनाइटेड किंगडम । रीता Campos-Pires Fundação पैरा ए Ciência ई ए Tecnologia, लिस्बन, पुर्तगाल से डॉक्टरेट प्रशिक्षण पुरस्कार के प्राप्तकर्ता था । केटी हैरिस वेस्टमिंस्टर मेडिकल स्कूल रिसर्च ट्रस्ट, लंदन, यूनाइटेड किंगडम से एक पीएचडी के छात्र के प्राप्तकर्ता था ।
इंपीरियल कॉलेज में रॉयल ब्रिटिश सेना सेंटर फॉर ब्लास्ट इंजरी स्टडीज (RBLCBIS) के सहयोग से यह मॉडल विकसित किया गया था । हम रॉयल ब्रिटिश सेना की वित्तीय सहायता स्वीकार करना चाहते हैं । सहयोग या आगे विस्तार में रुचि शोधकर्ताओं लेखकों या RBLCBIS संपर्क कर सकते हैं ।
हम डॉ अमरजित समरा, अनुसंधान के निदेशक, रक्षा चिकित्सा, बर्मिंघम, यूनाइटेड किंगडम के लिए रॉयल सेंटर, इस काम के समर्थन के लिए, स्कॉट आर्मस्ट्रांग, सर्जरी के विभाग & कैंसर, इंपीरियल कॉलेज लंदन, प्रारंभिक प्रयोगों के साथ सहायता के लिए धन्यवाद , Theofano Eftaxiopolou, हरि अरोरा & लूज Ngoc गुयेन, इंजीनियरिंग इंपीरियल कॉलेज लंदन के विभाग, & विलियम गर्व, भौतिकी इंपीरियल कॉलेज लंदन के विभाग, सदमे पर सलाह के लिए-ट्यूब, रक़ील Yustos, अनुसंधान तकनीशियन, विभाग जीवन विज्ञान के, इंपीरियल कॉलेज लंदन, तकनीकी सहायता के लिए, पॉल ब्राउन MBE, कार्यशाला प्रबंधक और स्टीव नेल्सन, कार्यशाला तकनीशियन, भौतिकी विभाग, इंपीरियल कॉलेज लंदन, धातु के छल्ले बनाने के लिए, भौतिकी विभाग के नील पॉवेल, शाही कॉलेज लंदन, कलाकृति के लिए ।
Geys balanced salt solution | Sigma UK | G9779 | |
D- glucose | Sigma UK | G8270 | |
Antibiotic/antimycotic | Sigma UK | A5955 | |
Minimum essential medium Eagle | Sigma UK | M4655 | |
Hanks balanced salt solution | Sigma UK | H9269 | |
Horse serum | Sigma UK | H1138 | |
L-glutamine | Sigma UK | G7513 | |
HEPES | VWR Prolabo, Belgium | 441476L | |
Sodium hydroxide | Sigma UK | S-0945 | |
Tissue culture inserts | Millicell CM 30 mm low height Millipore | PICM ORG 50 | |
6-well plates | NUNC, Denmark | 140675 | |
Propidium iodide | Sigma UK | P4864 | |
Sterile polyethylene bags – Twirl'em sterile sample bags | Fisherbrand | 01-002-30 | |
Portex Avon Kwill Filling Tube 5" (127mm) | Smiths Medical Supplies | E910 | |
Epifluorescence microscope | NIKON Eclipse 80i, UK | ||
Microscope objective | Nikon Plan UW magn. 2x, NA 0.06, WC 7.5 mm | ||
Microscope filter | Nikon G-2B (longpass emission) | ||
Mylar electrical insulating film, 304 mm x 200 mm x 0.023 mm | RS Components UK | 785-0782 | |
Pressure transducer | Dytran Instruments Inc. | 2300V1 | |
Tissue chopper | Mickle Laboratory Engineering Co., Guildford, Surrey, United Kingdom. | Mcllwain tissue chopper | |
Silicone elastomer | Dow Corning, USA | Sylgard 184 | |
Graphing & statistics software | GraphPad Software, USA | Prism 7.0 |