Summary

الاشتقاق وتمايز الخلايا الجذعية الوسيطة المبيض الكلاب

Published: December 16, 2018
doi:

Summary

هنا، نحن تصف طريقة للعزل والتوسع، وتمايز الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة المبيض الكلاب البوليسية.

Abstract

وقد تزايد الاهتمام بالخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) على مدى العقد الماضي بسبب سهولة العزل والتوسع، والثقافة. في الآونة الأخيرة، أظهرت الدراسات قدرة التمييز على نطاق واسع التي تمتلك هذه الخلايا. المبيض يمثل مرشح واعدة للعلاجات المستندة إلى خلية يرجع ذلك إلى حقيقة أن غنية في MSCs، وأنه كثيرا ما يتم تجاهلها بعد العمليات الجراحية أوفاريكتومي كالنفايات البيولوجية. توضح هذه المقالة الإجراءات للعزلة، التوسع، والتفريق بين MSCs المستمدة من المبيض الكلاب البوليسية، دون الحاجة إلى فرز الخلايا التقنيات. ويمثل هذا البروتوكول أداة هامة للطب التجديدي بسبب انطباق واسع النطاق لهذه الخلايا اختلاف الغاية في التجارب السريرية والأغراض العلاجية.

Introduction

عدد الدراسات المنشورة التي تركز على الخلايا الجذعية قد زاد زيادة كبيرة على مدى العقد الماضي، مجهود بحثي قد تم تغذيها الهدف الجماعي لاكتشاف علاجات الطب التجديدي قوية. الخلايا الجذعية لديها علامات تعريف الأساسي هما: التجديد الذاتي والتمايز. الخلايا الجذعية الوسيطة هي المسؤولة عن دوران الأنسجة العادية وقدرة أكثر تقييداً من التمايز عند مقارنة بالخلايا الجذعية الجنينية1. في الآونة الأخيرة، وقد أظهرت العديد من الدراسات مجموعة واسعة من التفريق بين MSCs، وموضوع قيد المناقشة عما إذا كانت هناك اختلافات بين الخلايا الجذعية الجنينية والكبار في كل2.

ظهارة سطح أوفاريوم هو غير ملتزم بها طبقة من الخلايا، أقل نسبيا المتباينة، التي تعبر عن كل علامات الظهارية والوسيطة3، الاحتفاظ بالقدرة على التفريق في أنواع مختلفة من الخلايا في الاستجابة إلى 4من الإشارات البيئية. الموقع الدقيق للخلايا الجذعية في المبيض ليست معروفة جيدا؛ ومع ذلك، اقترح أن المتكفل بيبوتينتيال في الباجينا الغلالة تثير الخلايا الجرثومية5. الدراسات المناعية يكون الافتراض بأن هذه الخلايا اللحمية من أصل6 أو يقع في أو الدانية إلى سطح المبيض7. أن الخلايا الجذعية الوسيطة التعبير عن مستقبلات العديدة التي تلعب دوراً هاما في الخلية الالتصاق8، تجربة صمم لاختبار فرضية أن تحديد عدد الخلايا التي تحتوي على الانضمام السريع أن عزل أن خلايا وضوح تشاراكتيريزابل كالوسيطة في الطبيعة. في الآونة الأخيرة، ذكرت مجموعتنا اشتقاق MSCs من أنسجة المبيض استناداً إلى قدرتها على الانضمام إلى سطح البلاستيك طبق الثقافة في ح 3 الأول للثقافة، من أجل الحصول على عدد سكان المنقي للخلايا العارضة التصاق السريع9. وهنا يصف لنا الطريقة المتقدمة لعزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة المبيض.

Protocol

وأجريت هذه التجربة مع المبايض أربعة كلاب أنثى مهجنة تبرعت بعد الجراحة الاختيارية في برنامج تعقيم الكلاب البوليسية. وأقر هذا تجربة “لجنة الأخلاقيات” في استخدام الحيوانات في أونيسب-فكاف (البروتوكول رقم 026991/13). 1-إعداد التجريبية إعداد أو شراء 500 مل من مخزنة الفوسفات المالح…

Representative Results

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من الكلاب المبيض: ويرد الإجراء عزلة MSC المبيض في الشكل 1. بعد الجراحة، وتنميق الأنسجة، والهضم كولاجيناز، وتغيير الإعلام ح 3 بعد بداية الثقافة، كان عدد سكانها MSC المفترضة مع خصا…

Discussion

وهنا نحن نقدم الأدلة أن MSCs يمكن أن تكون معزولة من أنسجة المبيض الكلاب البوليسية، التي تعتبر النفايات البيولوجية بعد أوفاريكتومي. يرجع ذلك إلى حقيقة أن العديد من أنواع الخلايا ويمكن الاطلاع في المبيض، اقترحنا بروتوكول لتحديد MSCs على أساس على الانضمام السريع للبلاستيك، والتي نجحت بتحديد ال…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

الكتاب يعترف البرنامج تعقيم الكلاب في أونيسب-فكاف يرجى توفير المبايض. وأيد هذا العمل منح من FAPESP (عملية رقم 2013-14293-0) والرؤوس.

Materials

DPBS  Thermo Fisher 14190144
Collagenase I Thermo Fisher 17100017
Tissue flask Corning CLS3056
DMEM low glucose Thermo Fisher 11054020
FBS Thermo Fisher 12484-010
TrypLE express Thermo Fisher 12604021
StemPro Adipogenesis Differentiation Kit Thermo Fisher A1007001
StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit Thermo Fisher A1007101
StemPro Osteogenesis Differentiation Kit Thermo Fisher A1007201
STEMdiff Definitive Endoderm Kit StemCell 5110
Penicillin-Streptomycin Thermo Fisher 15070063
CD45 AbD Serotec MCA 2035S
CD34 AbD Serotec MCA 2411GA
CD90 AbD Serotec MCA 1036G
CD44 AbD Serotec MCA 1041
Nestin Milipore MAB353
β-Tubulin  Milipore MAB1637
DDX4 Invitrogen PA5 -23378
IgG- FITC AbD Serotec STAR80F
IgG- FITC AbD Serotec STAR120F

Referenzen

  1. Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D., Atala, A., Lanza, R. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). , 513-527 (2013).
  2. Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
  3. Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22 (2), 255-288 (2001).
  4. Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 581-588 (2007).
  5. Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3 (1), 17 (2005).
  6. Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93 (8), 2594-2601 (2010).
  7. Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428 (6979), 145 (2004).
  8. Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28 (8), 875-884 (2000).
  9. Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50 (6), 12391 (2017).
  10. Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
  11. Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16 (3), 381-390 (1966).
  12. Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12 (9), 1335-1347 (1997).

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Hill, A. B., Hill, J. E., Bressan, F. F., Miglino, M. A., Garcia, J. M. Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells. J. Vis. Exp. (142), e58163, doi:10.3791/58163 (2018).

View Video