从人类胸腺髓样树突状细胞和上皮细胞的分离

胸腺是在T细胞发育发生器官。随着年龄的增长其相对和绝对尺寸减小，当它变得先后被脂肪取代，虽然胸腺活性仍然可以在旧时代被检测到。其对免疫反应的重要性表现在20世纪60年代初^1。

对T细胞库是通过T细胞受体与不同种类的胸腺的APC，其提供生存或死亡的线索来发展T细胞，导致功能性，在很大程度上自耐受T细胞库²肽-MHC复合物的相互作用形成的。

约98％的细胞在人类胸腺正在开发称为胸腺T细胞。剩余的2％由许多不同的细胞类型，包括各种TEC的（皮质，延髓，囊下），粒细胞和浆细胞样DC（MDC，PDC）的巨噬细胞，B细胞，成熟重新循环T细胞，粒细胞， fibroblasts，内皮细胞和用表达的表型非常罕见的上皮细胞类似，从其他组织如肌肉，神经和呼吸上皮（ 图1）的细胞。这些中，TEC和DC处于正常胸腺中发现的主要的APC类型。近年来，这些APC类型的文化和分子分析的净化已经获得了越来越多的关注。由于其低频率中的任进行详细的分析，这些细胞类型的分离需要高效的，可重现的和成本有效的方法。这里介绍的方法是从先前公布的研究^3,4的修改。

与任何其他组织，从胸腺细胞提取可以通过酶促解聚的细胞 – 细胞和细胞 – 基质相互作用的网络，以便获得单细胞悬浮液来实现。有一定的参数，如良好的分离效率，细胞产量，细胞活力和保持细胞的S需要urface标记物是至关重要的，并为这些稀有细胞群的成功分离进行优化。

在这个协议中，直流和TEC亚群分离是通过使由机械破碎和酶消化组织的单细胞悬浮液进行。我们用胶原酶溶组织梭菌 ，其中有不同的酶活性比例的平衡，打破了保持组织在一起的天然胶原。 DNA酶I包括在酶溶液，以减少细胞聚集由于从死细胞的游离DNA（胸腺是非常敏感的），我们还提供了另一种方法，在典型的酶消化组织，涉及机械和酶组织治疗由组织离解的协助。单细胞悬浮液，然后进行单Percoll密度离心细胞的低密度部分（LDF）的富集。从细胞中的该级分，DC可以通过染色F是孤立或DC表面标记物（ 即表面CD11c ^+）和使用磁性分离或荧光激活细胞分选（FACS）。不像含有细胞在胸腺中的绝大多数的淋巴样细胞，TEC不以高水平表达CD45，但正对上皮细胞粘附分子EpCAM的。 CTEC可以从髓质TEC通过对CDR-2（皮质树突网状细胞-2）抗体^4,5和稍低的EpCAM表达识别的尚未定义的抗原的表达来区分。差动共表达的EpCAM和CDR2的允许这些TEC的子集通过高速细胞的高效分离排序^6。

这里介绍的协议被优化用于人类胸腺组织。该过程的持续时间取决于组织的量和实验者的能力以及细胞分选器的速度，如果FACS分选被使用。通常情况下，该协议的直流隔离可以在5完成-6小时和TEC在8-10小时的隔离。直流和TEC亚群的胸腺组织中分离对时间很敏感。更快的分离过程中，细胞的状况就越好。最后，可以用于进一步调查喜欢的mRNA和比较研究蛋白的表达，PCR实验，蛋白分离，分子图谱（ 即转录，微RNA分析），以及细胞培养物⁶的分离的细胞。

操守准则

为了能够与人体胸腺组织工作，研究人员需要自组织通常是由未成年人获得了当地伦理委员会或主管部门以及捐助者的知情同意书（或通常是他或她的父母，获得批准孩子）。此外，所有人体组织应作为应采取潜在的传染和适当的措施，如戴手套工作， 等处理。