Neste vídeo podemos demonstrar a técnica da litografia macia com polydimethyl siloxano (PDMS) que usamos para farbricate um dispositivo micro para os neurônios cultura.
Neste vídeo, demonstramos a técnica da litografia macia com polydimethyl siloxano (PDMS) que usamos para fabricar um dispositivo micro para os neurônios cultura. Anteriormente, uma bolacha de silício foi modelado com o projeto para o dispositivo neurônio microfluídicos usando SU-8 e fotolitografia para criar um molde mestre, ou o que nós simplesmente nos referimos como "mestre". Em seguida, despeje o polímero de silicone PDMS em cima do mestre que é então curado pelo aquecimento do PDMS a 80 ° C por 1 hora. O PDMS forma um molde negativo do dispositivo. O PDMS é, então, cuidadosamente cortadas e levantou longe do mestre. Buracos são perfurados em que os reservatórios serão PDMS eo excesso aparadas longe do dispositivo. O nitrogênio é usado para afastar qualquer excesso de detritos a partir do dispositivo. Neste ponto os dispositivos estão prontos para usar e pode tanto ligado a Corning Glass cobrir No. 1 com um plasma esterilizador / limpador ou podem ser reversivelmente ligado à tampa de vidro, basta colocar o dispositivo na parte superior da tampa de vidro. A ligação reversível de que o dispositivo de vidro é coberto por um vídeo em separado e exige, primeiro, que o dispositivo seja esterilizado ou com álcool 70% ou em autoclave. Plasma tratar esteriliza os dispositivos de forma que nenhum tratamento adicional é necessário. É, no entanto, importante, quando plasma-tratamento dos dispositivos, para adicionar líquido para os dispositivos dentro de 10 minutos do tratamento de plasma, enquanto as superfícies são ainda hidrofílico. Esperando mais de 10 minutos para adicionar líquido para o dispositivo torna difícil para o líquido para entrar no dispositivo. Os dispositivos são tipicamente neurônio plasma obrigado a tampa de vidro e 0,5 mg / ml poli-L-lisina (PLL) em tampão borato pH 8,5 é imediatamente adicionado ao dispositivo. Após um mínimo de três horas de incubação com o PLL, os dispositivos são lavados com água dH2O um mínimo de 3 vezes, com pelo menos 15 minutos entre cada lavagem. Em seguida, a água é removida e novas mídias é adicionado ao dispositivo. Neste ponto, o dispositivo está pronto para uso. É importante lembrar, neste ponto, nunca remover toda a mídia do dispositivo. Sempre deixe a mídia no canal principal.
Neste vídeo demonstramos como fazer e preparar um PDMS dispositivo micro que usamos para os neurônios cultura pol O dispositivo permite a obtenção de uma fração pura axonal separados por microgrooves do compartimento contendo uma mistura de corpos celulares, dendritos e axônios . Estes dispositivos permitem ao pesquisador estudar os efeitos de vários tratamentos, bem como fornecer uma plataforma para realizar dano físico no axônios e observar os efeitos que estes tratamentos têm sobre os neurônios. O dispositivo também fornece um nível de cultura a fim de neurônios que ajuda a facilitar os estudos de transportes. Além disso, o microgrooves, que separam o compartimento de cultura de células do compartimento do axônio, permite o isolamento do fluídica entre os dois compartimentos tornando possível tratar uma parte lateral do dispositivo sem afetar o outro lado do dispositivo diretamente com o tratamento. Esta propriedade permite ao pesquisador estudar os efeitos, como transdução de sinal e transporte que resultam do tratamento.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
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PDMS | Reagent | Dow Corning | Sylgard 184 with curing agent Please consult Dow Corning to find a vendor near you | |
Plasam Cleaner | Tool | Harrick | http://www.harrickplasma.com/ | |
Neural Basal Media | Reagent | Invitrogen | 21103-049 | Neural Basal Media is obtained by Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
B27 | Reagent | Invitrogen | 17504-044 | B27 is a proprietary supplement available through Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
Glutamax | Reagent | Invitrogen | 35050-061 | Glutamax is available through Invitrogen under their Gibco line of celll culture reagents. |
Cornig No. 1 Cover Glass | cover glass | Corning | Corning No. X2935 244 | Available through Fisher Scientific, Fish Catalog number 12-531D |
60 mm Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-13A | 60 mm polystyrene sterile petri dishes are used to house the device bound to glass. |
BD Falcon 50 ml Tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352098 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-49A |
BD Falcon 15 ml tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352097 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-70C |
Poly-L-Lysine | Reagent | Sigma | P-1274 | |
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