– A glicólise começa com uma única molécula de glicose. Usando o ATP, a enzima hexoquinase transfere um grupo fosfato para a glicose-carbono seis para produzir glicose 6-fosfato, que fica preso dentro da célula devido à sua carga negativa. Em seguida, a enzima fosfoglucose isomerase catalisa a conversão da fosfoglucose em um dos seus isômeros, a frutose 6-fosfato. A fosfofrutose pode agora ser fosforilada por uma enzima limitante da taxa, a fosfofrutoquinase, para produzir frutose 1,6-bifosfato. Finalmente, com dois grupos fosfato ligados, a molécula de açúcar é clivada por aldolase em dois isômeros de 3 carbonos, gliceraldeído 3-fosfato ou G3P, e di-hidroxiacetona fosfato, DHAP. Outra enzima catalisadora triosefosfato isomerase converte o DHAP em G3P para produzir duas moléculas. Assim, durante esta fase de investimento de energia, um total líquido de dois ATPs é usado para dividir uma molécula inicial de glicose em dois açúcares menores.