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JoVE 杂志 免疫与感染
Production of Adeno-Associated Virus Vectors in Cell Stacks for Preclinical Studies in Large Animal Models
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Production de vecteurs de virus adéno-associés dans des piles cellulaires pour des études précliniques dans de grands modèles animaux

DOI:
10.3791/62727-v

•

07:21 min

•

June 30, 2021

•

, , , , , , , ,
1Department of Pathobiology,University of Guelph

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:46Double Plasmid Transfection of HEK293 Cells in Cell Stacks
  • 02:30Harvesting Adeno-Associated Virus AAV and Chemical Lysis of The Transfected HEK293 Cells
  • 03:23AAV Vector Purification Using Heparin Affinity Chromatography
  • 05:45Results: Serum Human Monoclonal Antibody (hIgG) Expression in Animals Upon Administration of AAV6.2FF-hIgG
  • 06:41Conclusion

Summary

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Nous fournissons ici une procédure détaillée pour la production à grande échelle de vecteurs AAV de qualité recherche en utilisant des cellules HEK 293 adhérentes cultivées dans des piles de cellules et la purification par chromatographie d’affinité. Ce protocole donne systématiquement >1 x 1013 génomes vectoriels/mL, fournissant des quantités vectorielles appropriées pour les études sur les grands animaux.

Tags

Adeno-associated VirusAAVViral Vector ProductionHEK293 CellsCell StacksPreclinical StudiesLarge Animal ModelsGene TherapyHeparan SulfateCell CulturePolyethyleneimineCentrifugationClarified SupernatantCell Pellets

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