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체 외 형광 공명 에너지 전달에 밀리초 시간 규모에서 단백질 복합물의 역학을 공부 하는 사용 하 여
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JoVE 杂志 生物化学
Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale
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체 외 형광 공명 에너지 전달에 밀리초 시간 규모에서 단백질 복합물의 역학을 공부 하는 사용 하 여

DOI:
10.3791/59038-v

•

10:50 min

•

March 14, 2019

•

, ,
1Department of Biochemistry,Purdue University, 2Department of Botany and Plant Pathology,Purdue University, 3Center for Plant Biology,Purdue University

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:33Designing the FRET Assay
  • 01:12Preparation of Cul1AMC•Rbx1, the FRET Donor Protein
  • 04:42Preparation of FlAsHCand1, the FRET Acceptor Protein
  • 05:18Testing and Confirmation of the FRET Assay
  • 06:08Measuring the Association Rate Constant
  • 07:37Measuring the Dissociation Rate Constant of Cul1•Cand1 in the Presence of Skp•F-box Protein
  • 08:33Results: Dynamics Of Protein Complexes
  • 10:30Conclusion

Summary

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단백질 단백질 상호 작용은 생물 학적 시스템에 대 한 중요 한 고 단백질 복합물의 기능과 역학에 대 한 통찰력을 제공 하는 바인딩 활동의 연구. 형광 공명 에너지 전달 및 중지 흐름 기법을 사용 하 여 복잡 한 단백질의 운동 매개 변수를 수량화 하는 방법을 설명 합니다.

Tags

FRETProtein ComplexKineticsAssociationDissociationCOL1CAND17-amino-4-methylcoumarinFlASHCell LysisSonicationCentrifugationGlutathione BeadsElutionThrombinBuffer A

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