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Uma análise quantitativa para expressar Insulin-formadoras de colônias Progenitores
JoVE 杂志
生物学
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JoVE 杂志 生物学
A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

Uma análise quantitativa para expressar Insulin-formadoras de colônias Progenitores

DOI:
10.3791/3148-v

•

14:39 min

•

November 28, 2011

•

, , , , , ,
1Department of Biotechnology & Bioinformatics,California State University Channel Islands, 2Department of Diabetes, Endocrinology and Metabolism,Beckman Research Institute of City of Hope, 3The Irell & Manella Graduate School of Biological Sciences,Beckman Research Institute of City of Hope

Chapters

  • 00:05Title
  • 03:34Generating Conditioned Medium (CM) For the Colony Assay
  • 05:13Obtaining a Single Cell Suspension of Pancreatic-like Progenitors by Fluorescence Activated Cell Sorting
  • 07:55Plating Sorted Cells to Semi-solid Culture
  • 10:49Observing Colony Formation under the Light Microscope
  • 11:47Ngn3-EGFP+ Derived Colonies Express Insulin
  • 13:21Conclusion

Summary

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A tridimensionais ensaio clonogênica que permite pancreático-como progenitores de se diferenciar em insulina expressar colônias é descrito. Este método tira vantagem de semi-sólido mídia contendo fatores Matrigel metilcelulose, e crescimento, no qual progenitores única proliferam e se diferenciam<em> In vitro</em>, Permitindo a quantificação do número de células progenitoras funcional em uma população.

Tags

Quantitative AssayInsulin-expressing Colony-forming ProgenitorsPancreatic Stem CellsProgenitor Cell BiologyIn Vitro AssaySingle Cell AnalysisLineage PotentialPancreatospheresSuspension CultureSingle Cell DepositionCulture MediaNumerationLabor-intensivePancreatosphere-initiating ProgenitorsProliferation And DifferentiationSemi-solid Media Based Colony AssayMethylcelluloseThree-dimensional Space

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