Summary

Подготовка гидролизат кератина от куриные перья и его применение в косметике

Published: November 27, 2017
doi:

Summary

Целью протокола является подготовить гидролизат кератина от куриные перья в щелочной ферментативный гидролиз и проверить ли добавление гидролизат кератина в косметике мазь базовый улучшает барьерные функции кожи (повышение гидратации и снижается трансэпидермальную потерю воды). Испытания проводятся на мужчин и женщина добровольцев.

Abstract

Гидролизаты кератина (KHs) являются установленных стандартных компонентов в Косметика для волос. Понимание увлажняющий эффект KH выгодно для косметики, ухода за кожей. Целями Протокола являются: (1) для обработки куриные перья в KH, щелочные ферментативный гидролиз и очищения методом диализа и (2) для проверки, если добавление KH в базу мазь (OB) повышает гидратацию кожи и улучшает барьерные функции кожи, уменьшение трансэпидермальную потерю воды (TEWL). В щелочной ферментативный гидролиз перья инкубируют при более высокой температуре в щелочной среде, а затем в группе мягких условиях, гидролизуется с протеолитических ферментов. Dialyzed решение KH, вакуумные сушеные и молотые в мелкий порошок. Косметических препаратов, включающий от нефти в водной эмульсии (O/W), содержащий 2, 4 и 6% Вес кН (на основании веса Обь) готовы. Проводится тестирование увлажняющими свойствами KH на 10 мужчин и 10 женщин промежутки времени 1, 2, 3, 4, 24 и 48 ч. протестированных составов распространяются на участках обезжиренной ладонной предплечья. Увлажнение кожи рогового слоя (SC) оценивается путем измерения емкости кожи, которая является одним из наиболее мире используется и простых методов. TEWL основан на измерении количество воды, перевозимых в определенный район и период времени от кожи. Оба метода являются полностью неинвазивной. KH делает отличные окклюзионной; в зависимости от добавления KH в Обь она приносит сокращение на 30% в TEWL после применения. KH также функционирует как увлажнитель, как он связывает воду из нижних слоев эпидермиса к SC; в оптимальное дополнение KH в Обь до 19% рост в гидратации в мужчин и 22% рост женщин происходит.

Introduction

Скотобойни, пищевой промышленности и Кожевенная промышленность ежегодно производят огромное количество твердых кератин побочных продуктов – шерсть, перья, щетина, копыта, когти, рога и тому подобное. Согласно последним статистическим данным общая живой вес кур, индеек, уток и другие убой птицы в США составляет 62,5 миллиарда фунтов за год1; в ЕС это примерно 28,7 млрд фунтов в год. Учитывая, что перья до 8,5% от веса всего птицы, США только ежегодно производит около 5,3 млрд фунтов отходов перья2.

Кератин является белок экспонируется высокая химическая стойкость, потому что это сильно Пенополиолефины с мосты дисульфида, которые затрудняют его обработки. Получения растворимых продуктов требует раскалывание перекрестные ссылки и возможно проведение гидролиза пептидных связей3. Расщепление мосты дисульфида может действовать через реакции анионов тиоловых согласно следующим шаблон4,5:

S + – SbSc– ↔ – Sb + – SSc

С очень высоким рН гидролиз мосты дисульфида также появляется в соответствии с узором6

-SS + → OH S-Сох

В мягких условиях (рН около 8) даже sulfitolysis проходит по следующей схеме:

-SS – + HSO →3 – ш + – SSO3

Наиболее экономичным способом унижающего достоинство Кератин является микробных разбивка, который характеризуется мягкая реакция условий во время обработки и высокой разбивка КПД (около 90%)7,8. Keratinases производятся некоторые бактерии, изолированный от почвы и кератин отходов9. Микробной keratinases гидролизуют жесткой и сильно сшитого кератин структур10 и результирующая KH подготовлен богаты растворимые белки, без потери незаменимых аминокислот, обнаруженных в нем11.

Для того, чтобы включать белка в косметических препаратов (например, эмульсии, лосьоны и гели), требования обеспечить, что такие белки, растворимые в воде, данные системы являются прозрачными и что повторное агрегирование пептидов избегать из-за гидрофобных взаимодействий. Таким образом обычной практикой является применение гидролизатов белков, таких как гидролизованный коллаген, эластин и кератина. При добавлении гидролизаты в косметические эмульсии, предпринимаются шаги для обеспечения что гидролизат сначала растворяется в воде. В некоторых случаях желательно, что белок (или гидролизата) растворяется в спирте или других органических растворителей12.

KH обычно характеризуется в шампуни, кондиционеры, лосьоны и Питательная сыворотка для волос, а также туши для ресниц, ногтей и агентов макияж глаз. Эффекты KH, объявил обычно включают в себя, образуя защитную пленку, разглаживание волос или ногтей структуры, повышенной пластичностью и внешний вид обработанной формирования, регулирующих последовательность продуктов и поощрение формирования пены13 , 14. также было доказано, что KH уменьшает поверхностное натяжение, следовательно добавок в косметике могут способствовать сокращение эмульгатор добавляется стабилизировать кремов. KH ограничить последствия раздражения, вызванные моющие средства (ПАВ) кожи, глаз и волос, таким образом уменьшая любые потенциальные побочные эффекты чистящих средств на ткани (например, обезвоживание кожи, твердости и снижение барьерной функции кожи). Высокая буферизации способности гидролизаты также использована для стабилизации рН косметики; пептиды короче длины имеют большую буферизации эффект15,16. Хотя как стандартные компоненты становятся установили KHs в волос и косметика для ногтей, а также используются в продуктах для ухода за кожей, исследования на увлажняющий эффект KH не появляются в современной литературе.

Щелочная ферментативный технология была разработана для обработки субпродуктов кератин в KH, и активное тестирование в процесс по воздействию целого ряда косметических добавки17,18,19,20 , 21 , 22. преимущество щелочной ферментативный гидролиз два этапа с помощью микробных протеазы для куриные перья достигает высокую эффективность в условиях мягкая реакция и качество KH является очень высоким, в отличие от гидролиза, занятых в сильных кислот или щелочей. На первом этапе перья инкубируют при более высокой температуре в щелочной среде, которая частично разрушает структуру кератина и набухает перья; После корректировки рН, перья гидролизуется с протеолитического фермента мягкая условиях на втором этапе. Dialyzed KH обладает высоким содержанием белков.

В целях метода, описанного здесь переработки птицы перья в KH через щелочные ферментативный гидролиз и тестирование эффект увлажняющими свойствами KH, применяется к косметическая Эмульсия O/W. Увлажняющие свойства расследуются инструментальные неинвазивные методы в естественных условиях. Наиболее частые методы для измерения кожи гидратации и барьер функция SC включают измерения электрических свойств кожи (проводимости или емкости). Различные методы для изучения гидратации SC включают вблизи инфракрасные многоспектральные воображая метод (NIM), спектроскопии ядерного магнитного резонанса, оптическая когерентная томография или переходных термотрансферные23. Барьерная функция SC коррелирует с TEWL SC и она измеряется вентилируемых палата метод, метод непроветриваемой камере и открытой камерой метод24.

Свойства модели составов определяются с помощью зонда Multi адаптера 5 МПа с тремя типами датчиков. Первая, измерялся см 825, увлажнения кожи меры путем оценки изменений в электрическую мощность на поверхности кожи; измерительного конденсатора показывает изменения в емкость поверхности кожи в единицах corneometric. Измерялся дает только относительной оценки гидратации кожи25. Для TEWL второй зонд, tewameter TM 300, используется для измерения градиента плотности испарения воды (в открытой камерой инструмент, основанный на закон Фика диффузии) из кожи косвенно две пары датчиков (температура и относительная влажность) Указывает количество воды, перевозимого в определенный район и период времени (г/м2/ч). Этот метод может обнаружить даже малейшее нарушение функции барьера кожи26. РН кожи является одним из показателей барьера и антимикробная функции SC27. Кислотность кожи мантии измерялась (третий) кожи 905 рН зонд, подключен к станции 5 МПа. Это специально разработанные зонд состоит из стекла с плоской вершиной электрода для контакта с полной кожей, подключенных к вольтметра. Система измеряет потенциальные изменения благодаря деятельности водорода катионов, окружающих очень тонкий слой твердых форм, измеренных в верхней части зонда. Изменения напряжения в отображаются как рН28.

Мы представляем эксперименты, разделены на три категории: (1) подготовка KH из курицы перья-двухступенчатый щелочной ферментативный гидролиз и его очистки методом диализа (удаление солей и низкомолекулярных фракций), (2) подготовка косметических составы, содержащие 2, 4 и 6% KH и (3) тестирование свойств KH, измеряя увлажнения, TEWL, кожи и кожи рН. Тестирование проводилось на 10 женщин, средний возраст 27,2 лет и 10 мужчин, средний возраст 26.2 лет. Метод отбора добровольцев и тестирования самой были проведены международные этические принципы био медицинских исследований, использование человеческих субъектов29; все лица дали их осознанного согласия до включения в исследование. Перед началом тестирования начался, добровольцев было предложено заполнить вопросник о состоянии их здоровья. Добровольцы, обязались избегать применения любых косметических продуктов испытательных участков и прилегающих районах в течение 24 ч до и во время периода испытаний; Кроме того они были лишь краткое вечером автомойки с проточной водой.

Protocol

Добровольцев набирали среди сотрудников и студентов нашего университета. Метод отбора был проведен согласно «международные этические принципы для биомедицинских исследований участие человеческие субъекты. Совет для международных организаций медицинских наук, Женеве (2002 год).» KH-эт?…

Representative Results

KH, подготовленный в соответствии с процедурой, представленные здесь (см. рис. 2) желтого цвета, легко растворим в воде с высоким содержанием белка (неорганические твердые вещества представляют < 2,0%); рН 1,0% раствора KH 5.3 и удовлетворяет требованиям для гидр…

Discussion

Преимуществом щелочных ферментативный гидролиз является, что он может быть изменен согласно будущих приложений KH. Например в приложениях Косметика Уход за волосами, где слегка коричневого цвета продукта не является препятствием, более высокую температуру в гидролиза могут быть приме…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта статья была написана с поддержкой проекта IGA/FT/2017/007 Томас Бата университета в Злине.

Materials

Material or chemicals
LIPEX 100T Novozymes LJP30020 Lipex – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g
Savinase Ultra 16L Novozymes PXN40001 Savinase – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g
Potassium hydroxide, KOH Sigma-Aldrich 302510289 Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11
Phosphoric acid solution, H3PO4 Sigma-Aldrich W290017 Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00
Sodium chloride physiological solution Sigma-Aldrich 52455 Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl
Sodium hydroxide, NaOH Penta s.r.o. 40216 Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00
AmiFarm (Cremor base-A) Fagron 608425 Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben.
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers IKA-labortechnik Z404020 Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs
IKA Propeller stirrer, 3-bladed IKA-labortechnik R 1381 Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer Ø: 45 mm, shaft Ø: 8 mm, shaft length: 350 mm
Dialysis tubing closures Sigma-Aldrich Z371017-10EA Dialysis tubing closures, red, size 110 mm
Dialysis tubing cellulose membrane Sigma-Aldrich D9402-100FT Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.)
DOMO Pot with stailess, LCD DOMO Elektronic DO42325PC Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 ° C, operation LCD display
Hettich zentrifugen Universal 32 Gemini bv 2770 GS1R Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm
LT 3 shaking device Fischer Scientific 6470.0002 Orbital shaking device
KERN 440-47N Kern 440-47N Laboratory balance
KERN 770 Kern 770 -N Laboratory analytical balance
VENTICELL 222 – Komfort BMT, MMM Group C 131749 Drying oven, temperature control 30-100 ° C, air circulation control
Vacucell 55 – EVO BMT, MMM Group B 050328 Vacuum drying oven, temperature control 30-100 ° C
PULVERISETTE 19 Fritsch 19.1030.00 Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives
Multi Probe Adapter System MPA 5 Courage & Kazaka Electronic 10225237 MPA 5 Station – equipment for measurement hydratation, TEWL and pH
Skin pH-meter PH 905 probe Courage & Kazaka Electronic Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp
Corneometer CM 825 probe Courage & Kazaka Electronic Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum).
Tewameter TM 300 Courage & Kazaka Electronic Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL)
Heidolph RZR 2020 Heidolph 13-225-007-03-1 Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm
Heidolph mechanical stirrer BR 10 Heidolph Z336688-1EA Blade impeller crossed stirrer
Fagor FS 12 Fagor BTT-138 Laboratory refrigerator with freezer space
WTW bench pH/mV meter WTW Z313165 High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories
Container RPC Superfos 13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm
Name Company Catalog Number Comments
Software
Microsoft Office 2010 Microsoft
C+K software Courage and Khazaka Electronic GmbH MPA 5 station operating software

References

  1. United States Department of Agriculture – National Agricultural Statistics Services. . Poultry Slaughter, 2016 Summary. , (2016).
  2. McGovern, V. Recycling poultry feathers: more bang for the cluck. Environ.Health Perspect. 108 (8), A336-A339 (2000).
  3. Gousterova, A., et al. Degradation of keratin and collagen containing wastes by newly isolated thermoactinomycetes or by alkaline hydrolysis. Lett. Appl. Microbiol. 40 (5), 335-340 (2005).
  4. Yamauchi, K., Yamauchi, A., Kusunoki, T., Khoda, A., Konishi, Y. Preparation of stable aqueous solution of keratins, and physiochemical and biodegradational properties of films. Biomed. Mater. Res. 31 (4), 439-444 (1996).
  5. Schrooyen, P. M. M., Dijkstra, P. J., Oberthur, R. C., Bantjes, A., Feijen, J. Partially carboxymethylated feather keratins. 2. Thermal and mechanical properties of films. J. Agric. Food Chem. 49 (1), 221-230 (2001).
  6. Mark, H. F., Gaylord, N. G., Bikales, N. M. . Encyclopedia of Polymer Science Technology: vol. 8: Keratin to Modacrylic Fibers. , (1968).
  7. Bertsch, A., Cello, N. A biotechnological process for treatment and recycling poultry feathers as a feed ingredient. Bioresour. Technol. 96 (15), 1703-1708 (2005).
  8. Grazziotin, A., Pimentel, F. A., de Jong, E. V., Brandelli, A. Nutritional improvement of feather protein by treatment with microbial keratinase. Animal Feed Sci. Technol. 126 (1-2), 135-144 (2006).
  9. Brandelli, A. Bacterial keratinases: useful enzymes for bioprocessing agroindustrial wastes and beyond. Food Bioprocess Technol. 1 (2), 105-116 (2008).
  10. Gusta, R., Ramnani, P. Microbial keratinases and their prospective applications: an overview. Appl.Microbiol. Biotechnol. 70 (1), 21-33 (2006).
  11. Vasileva-Tonkova, E., Gousterova, A., Neshev, G. Ecologically safe method for improved feather wastes biodegradation. International Biodeterior & Biodegradation. 63 (8), 1008-1012 (2009).
  12. Lodén, M., Barel, A. O., Paye, M., Maibach, H. I. Hydrating Substance. Handbook of Cosmetic Science and Technology. , 107-119 (2009).
  13. Teglia, A., Secchi, G., Goddard, E. D., Gruber, J. V. Chapter 9: Proteins in Cosmetics. Principles of Polymer Science and Technology in Cosmetics and Personal Care. , (1999).
  14. Magdassi, S. Delivery systems in cosmetics. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 123-124, 671-679 (1997).
  15. Dahms, G., Jung, A. Method for producing a protein hydrolysate. U.S. Patent. , (2014).
  16. Pons, R., Carrera, I., Erra, P., Kunieda, G., Solans, C. Novel preparation methods for highly concentrated water-in-oil emulsions. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 91 (3), 259-266 (1994).
  17. Mokrejs, P., Hrncirik, J., Janacova, D., Svoboda, P. Processing of keratin waste of meat industry. Asian J. Chem. 24 (4), 1489-1494 (2012).
  18. Mokrejs, P., Svoboda, P., Hrncirik, J. Processing poultry feathers into keratin hydrolysate through alkaline-enzymatic hydrolysis. Waste Manage. Res. 29 (3), 260-267 (2011).
  19. Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P. Producing keratin hydrolysates from sheep wool. Orient. J. Chem. 27 (4), 1303-1309 (2011).
  20. Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P., Vasek, V. Modeling technological conditions for breakdown of waste sheep wool. Rasayan J. Chem. 4 (4), 728-735 (2011).
  21. Polaskova, J., Pavlackova, J., Vltavska, P., Mokrejs, P., Janis, R. Moisturizing effect of topical cosmetic products applied to dry skin. J. Cosmet. Sci. 64 (5), 329-340 (2013).
  22. Polaskova, J., Pavlackova, J., Egner, P. Effect of vehicle on the performance of active moisturizing substances. Skin Res. Technol. 21 (4), 403-412 (2015).
  23. Verdier-Sévrain, S., Bonté, F. Skin hydration: a review on its molecular mechanisms. J. Cosmet. Dermatol. 6 (2), 75-82 (2007).
  24. Darlenski, R., Sassning, S., Tsankov, N., Fluhr, J. W. Non-invasive in vivo methods for investigation of the skin barrier physical properties. Eur. J. Pharm. Biopharm. 72 (2), 295-303 (2009).
  25. Berardesca, E. EEMCO guidance for assessment of stratum corneum hydration: electrical methods. Skin Res. Technol. 3 (2), 126-132 (1997).
  26. Rogiers, V. EEMCO guidance for the assessment of transepidermal water loss in cosmetic sciences. Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. 14 (2), 117-128 (2001).
  27. Ali, S. M., Yosipovitch, G. Skin pH: from basic science to basic skin care. Acta Derm. Venereol. 93 (3), 261-267 (2013).
  28. Agache, P., Humbert, P. . Measuring the Skin. , (2004).
  29. Council for International Organizations of Medical Sciences. . International Ethical Guidelines for Biomedical Research Involving Human Subjects. , (2002).
  30. Ruland, J. K. Transdermal permeability and skin accumulation of amino acids. Int. J. Pharm. 72 (2), 149-155 (1991).
  31. Draelos, Z. D. Therapeutic moisturizers. Dermatol. Clin. 18 (4), 597-607 (2000).
  32. Courage and Khazaka Electronic GmbH, Technical Charges. . Information and Operating Instructions for the Multi probe Adapter MPA and its Probe. , (2013).

Play Video

Cite This Article
Mokrejš, P., Huťťa, M., Pavlačková, J., Egner, P. Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics. J. Vis. Exp. (129), e56254, doi:10.3791/56254 (2017).

View Video