Summary

הכנת קרטין Hydrolysate של נוצות העוף ויישומו בתחום הקוסמטיקה

Published: November 27, 2017
doi:

Summary

המטרה של הפרוטוקול היא להכין את hydrolysate קרטין מן נוצות העוף הידרוליזה אלקליין אנזימטיות, כדי לבדוק אם הוספת hydrolysate קראטין לתוך משחה קוסמטיקה הבסיס משפר את תפקוד מחסום העור (מגביה הידרציה ו צמצום איבוד המים transepidermal). הבדיקות נערכות על גברים ואישה מתנדבים.

Abstract

קרטין hydrolysates (KHs) הם הרכיבים הסטנדרטיים הוקמה בתמרוקים ובישום. הבנת השפעת לחות ח’ היא יתרון עבור מוצרי קוסמטיקה לטיפוח העור. המטרות של הפרוטוקול הם: (1) כדי לעבד נוצות העוף לתוך ח’ על ידי הידרוליזה אלקליין אנזימטי וטהרם על-ידי דיאליזה, (2) כדי לבדוק אם הוספת ח’ לתוך בסיס משחה (אבוב) מגבירה את לחות העור, משפר את תפקוד מחסום העור על ידי צמצום אובדן מים transepidermal (TEWL). במהלך הידרוליזה אלקליין אנזימטי נוצות מודגרת קודם בטמפרטורה גבוהה בסביבה אלקליין ולאחר מכן, תחת תנאים מתון, הידרוליזה עם האנזים הפרוטאוליטי. הפתרון של ח’ הוא דיאליזה, ואקום מיובשים, ונגרס על אבקה. ניסוחים קוסמטיים המורכבת משמן בתחליב מים (O/W) המכיל 2, 4 ו- 6% במשקל של ח’ (מבוסס על משקל OB) מוכנות. בדיקות לחות המאפיינים של ח’ מתבצעת ב-10 אנשים, 10 נשים במרווחי זמן של 1, 2, 3, 4, 24 ו 48 ה ניסוחים נבדק פרוסים באתרים האמה volar degreased. לחות העור של הקרנית (SC) מוערך על ידי מדידת קיבוליות של העור, אשר הוא אחד מהשיטות בשימוש ופשוט ביותר ברחבי העולם. TEWL מבוססת על מדידת כמות המים מועברים לכל אזור מוגדר תקופת זמן מן העור. שתי השיטות הן לחלוטין לא פולשנית. ח’ הופך occlusive מעולה; בהתאם התוספת של ח’ לתוך OB, מביאה להקטנת 30% TEWL לאחר היישום. ח’ משמשת גם כחברת humectant, כמו זה נקשר מים מ בשכבות הנמוכות של האפידרמיס SC; על תוספת ח’ האופטימלי ב OB, למעלה כדי 19% עלייה הידרציה גברים ו- 22% עלייה נשים מתרחש.

Introduction

בתי המטבחיים, תעשיית המזון, תעשיית שיזוף מדי שנה מייצרים כמויות עצומות של תוצרי קרטין מוצק – צמר, נוצות, זיפים, פרסות, טפרים, קרניים, וכדומה. על פי נתונים סטטיסטיים האחרון, המשקל הכולל בשידור חי של תרנגולות, תרנגולי הודו, ברווזים, ועופות אחרים שחט בארה ב הוא 62.5 מיליארד פאונד לכל השנה1; האיחוד האירופי הוא כ 28.7 מיליארד ליש ט בשנה. בהתחשב כי הנוצות לעשות עד 8.5% של המשקל הכולל עופות, ארה ב לבד מייצרת מדי שנה כ 5.3 מיליארד פאונד של נוצות פסולת2.

קראטין הוא חלבון מפגין עמידות כימית גבוהה כי זה חזק צולבים גשרים דיסולפידי רינדור העיבוד שלו קשה. קבלת מוצרים מסיסים דורש ביקוע חוצה קישורים ואולי בביצוע הידרוליזה של חלבון3. פצילות הגשרים דיסולפידי רשאי להמשיך דרך תגובה של אניון תיול על פי4,התבנית הבאה5:

S + S-bSc– ↔ – Sb + – SSc

עם רמת ה-pH מאוד גבוה, הידרוליזה של הגשרים דיסולפידי מופיע גם, לפי דפוס6

אס אס + OH ← – S – SOH

בתנאים מתון (pH 8 כ), אפילו sulfitolysis מתקיים לפי התבנית הבאה:

– אס – + HSO ←3 – SH + -SSO3

הדרך החסכונית ביותר של משפיל קרטין הוא פירוק מיקרוביאלי, אשר מאופיין על ידי תנאי ריאקציה מתון במהלך עיבוד וגבוה התמוטטות יעילות (כ 90%)7,8. Keratinases מיוצרים על ידי מספר החיידקים שבודד פסולת, אדמה, קרטין9. Keratinases חיידקים hydrolyze מבנים צולבים חריפה הנוקשה קרטין10 וח’ וכתוצאה מכך מוכן הוא עשיר בחלבונים מסיסים, ללא אובדן של חומצות אמינו חיוניות זוהה זה11.

על מנת לשלב את חלבון ההכנות קוסמטי (למשל, אמולסיות, קרמים, ג’לים), הדרישות להבטיח כי חלבונים כאלה הם מסיסים במים, המערכות נתון הם שקופים, את צבירת מחדש של פפטידים הוא נמנע בשל אינטראקציות הידרופוביות. לכן, מקובל ליישם את hydrolysates של חלבונים, כגון הידרוליזה קולגן, אלסטין, קרטין. בעת הוספת hydrolysates לתוך אמולסיות קוסמטיים, הפעולות הננקטות כדי להבטיח כי hydrolysate קודם מומס במים. במקרים מסוימים, רצוי כי החלבון (או את hydrolysate) הוא מסיס באלכוהול או ממיסים אורגניים אחרים12.

ח’ בדרך כלל בהשתתפות שמפו, מזגנים, קרמים, סרומים התזונתי שיער, כמו גם mascaras, לק של סוכנים איפור העין. ההשפעות ח’ הכריז בדרך כלל כוללים ויוצרים סרט מגן, החלקת השיער או מסמר המבנה, פלסטיות מוגברת והמראה של היווצרות שטופלו, המסדיר את העקביות של מוצרים, ולעודד היווצרות קצף13 , 14. גם הוכח כי ח’ מפחית מתח, ומכאן תוספי בקוסמטיקה יכולים להקל על הפחתה בכמות emulsifier הוסיף לייצב קרמים. ח’ להגביל את ההשפעות של גירוי המופעלות על-ידי ניקוי סוכנים (פיתחה) אל העור, העיניים, השיער, ובכך להקטין תופעות לוואי פוטנציאליות של ניקיון סוכנים על רקמות (למשל, התייבשות של העור, קשיות, מחסום ירידה בתפקוד העור). יכולת האגירה גבוהה של hydrolysates הוא מנוצל גם כדי לייצב את רמת החומציות של קוסמטיקה; פפטידים באורך קצר יותר יש יותר חציצה אפקט15,16. למרות KHs להפוך הקמנו בתור הרכיבים הסטנדרטיים שיער ציפורניים קוסמטיקה וכן מנוצל ב מוצרי טיפוח העור, מחקרים על השפעת לחות ח’ אינם מופיעים בספרות העכשווית.

פותחה טכנולוגיה אלקליות-אנזימטי לעיבוד תוצרי לוואי קראטין לתוך ח’, ויש בדיקות פעיל בתהליך על ההשפעות של מספר תוספים קוסמטיים17,18,19,20 , 21 , 22. היתרון של שני שלבים הידרוליזה אלקליין אנזימטי באמצעות פרוטאזות מיקרוביאלי נוצות העוף משיגה יעילות גבוהה בתנאים תגובה קלה ואת האיכות של ח’ הוא גבוה מאוד לעומת הידרוליזה המועסקים חומצות חזקות או בסיסים (אלקלים). בשלב הראשון, נוצות מודגרת בטמפרטורה גבוהה בסביבה אלקליין, אשר באופן חלקי משבש את מבנה קרטין, מתנפח הנוצות; לאחר התאמת רמת ה-pH, הנוצות הן הידרוליזה עם אנזים הפרוטאוליטי בתנאים קלה בשלב השני. ח’ dialyzed בעל תכולה גבוהה של חלבונים.

המטרות של השיטה המתוארת כאן עיבוד עופות הנוצות לתוך ח’ באמצעות הידרוליזה אלקליין אנזימטיות, בוחן את השפעת לחות המאפיינים של ח’ חלה על תחליב קוסמטיים O/W. המאפיינים לחות נחקרות על ידי פלייבק פולשני שיטות ויוו. השיטות הנפוצות למדידת תפקוד הידרציה ומכשול העור של SC כוללים מדידת תכונות חשמליות של העור (מוליכות או קיבול). שיטות שונות עבור חוקרים SC הידרציה כוללים ליד אינפרא-אדום מולטי ספקטריאליות מדמיין את השיטה (נים), ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית גרעינית, טומוגרפיה אופטית קוהרנטית או העברה תרמית ארעי23. מחסום הפונקציה של SC המתייחס TEWL של SC, הוא נמדד לפי שיטת החדר מאוורר, שיטת החדר מאוורר וכן שיטת החדר פתוח24.

המאפיינים של ניסוחים מודל נקבעים באמצעות מתאם מרובה בדיקה MPA 5 עם שלושה סוגים של הגששים. Corneometer הראשון, 825 ס מ, מידות לחות העור על-ידי הערכת שינויים ביכולת חשמל של פני השטח של העור; הקבל מדידה מציג שינויים קיבוליות של פני העור ביחידות corneometric. Corneometer נותן רק הערכה היחסי של העור לחות25. TEWL, המכשיר השני, tewameter TM 300, משמש למדידת צפיפות ה גרדיאנט אידוי מים (ב מכשיר פתוח קאמרית בהתבסס על חוק דיפוזיה של Fick) מן העור באופן עקיף על ידי שני זוגות של חיישנים (טמפרטורה, לחות יחסית) המציין את כמות המים מובלים לכל אזור מוגדר תקופת זמן (g/m2/h). בשיטה זו ניתן לזהות אפילו שמץ שיבוש העור מכשול פונקציה26. PH של העור הוא סימן אחד של מכשול ותפקוד אנטי מיקרוביאליים SC27. החומציות של המעטפת העור נמדדה על ידי בדיקה העור PH 905 (השלישי) מחובר לתחנת מגפ ס 5. המכשיר שתוכנן במיוחד הזה מורכב אלקטרודת זכוכית מצופה שטוח של מגע עם העור מלא, מחובר מודד. המערכת מודדת שינויים פוטנציאלי עקב הפעילות של קטיונים מימן סביב לשכבה דקה מאוד של צורות מוצק למחצה נמדד בחלק העליון של המכשיר. שינויי מתח מוצגים pH28.

אנו מציגים ניסויים כולל שלושה חלקים: (1) הכנה של ח’ מ עוף נוצות על ידי שני שלבים הידרוליזה אלקליין אנזימטי וטיהור שלה על-ידי דיאליזה (הוצאת מלחים ושברים נמוך-מולקולרי), (2) הכנת קוסמטיקה ניסוחים המכיל 2, 4 ו- 6% ח’, ו- (3) בדיקת המאפיינים של ח’ על ידי מדידת לחות, TEWL, העור ועור pH. הבדיקה בוצעה על 10 נשים עם והגיל הממוצע של 27.2 שנה, ב-10 אנשים עם והגיל הממוצע של שנים 26.2. השיטה של בחירת המתנדבים ולאחר הבדיקה עצמה נערכו על פי עקרונות אתיים הבינלאומי של מחקר ביו-רפואי ניצול ניסויים29; כל אדם נתן שלהם מדעת לפני ההכללה במחקר. לפני בדיקת התחילה, המתנדבים התבקשו להשלים שאלון על מצב הבריאות שלהם. המתנדבים מחויבים למנוע החלת כל מוצר קוסמטי אתרי מבחן והאזורים הסובבים במהלך 24 שעות לפני, במהלך תקופת הבדיקה; יתר על כן, הם הורשו רק ערב קצר שוטף עם מים זורמים.

Protocol

מתנדבים גויסו בקרב עובדים וסטודנטים של האוניברסיטה שלנו. השיטה של בחירת נערך על פי “הבינלאומי מוסר מנחים ביו-רפואית במחקר האנושי Involving. המועצה עבור ארגונים בינלאומיים למדעי הרפואה, ז’נבה (2002).” ח’ הוא מרכיב קוסמטי נפוץ בשימוש מוצרי טיפוח לשיער (שמפו, מזגנים, וכו ‘), ומכאן אישור ועדת הבדיק?…

Representative Results

ח’ שהוכנו לפי נוהל המובאת כאן (ראה איור 2) הוא צהוב בצבע, המתמוסס בקלות מים עם תכולת החלבון הגבוהה (מוצקים אורגניים מייצגים < 2.0%); ה-pH של התמיסה 1.0% של ח' הוא 5.3, מגשימים לכם את הדרישות עבור hydrolysates כיתה קוסמטיים. התשואה של ח' מחומר גלם 50 גרם הוא כ – 30%. חלוקת משקל מו…

Discussion

היתרון של הידרוליזה אלקליין אנזימטי הוא כך שניתן יהיה לשנותה בהתאם יישומים עתידיים של ח’. לדוגמה, קוסמטיקה טיפוח לשיער היישומים שבהם צבע חום בקלילות של מוצר אינה מהווה מכשול, טמפרטורה גבוהה יותר ב הידרוליזה ניתן להחיל שמוביל תשואה גבוהה יותר של ח’. בנוסף, זמן העיבוד יותר במהלך שני השלבים של…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

מאמר זה נכתב עם תמיכה של הפרויקט איגה/רגל/2017/007 של תומאס באטה אוניברסיטת Zlin.

Materials

Material or chemicals
LIPEX 100T Novozymes LJP30020 Lipex – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g
Savinase Ultra 16L Novozymes PXN40001 Savinase – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g
Potassium hydroxide, KOH Sigma-Aldrich 302510289 Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11
Phosphoric acid solution, H3PO4 Sigma-Aldrich W290017 Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00
Sodium chloride physiological solution Sigma-Aldrich 52455 Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl
Sodium hydroxide, NaOH Penta s.r.o. 40216 Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00
AmiFarm (Cremor base-A) Fagron 608425 Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben.
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers IKA-labortechnik Z404020 Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs
IKA Propeller stirrer, 3-bladed IKA-labortechnik R 1381 Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer Ø: 45 mm, shaft Ø: 8 mm, shaft length: 350 mm
Dialysis tubing closures Sigma-Aldrich Z371017-10EA Dialysis tubing closures, red, size 110 mm
Dialysis tubing cellulose membrane Sigma-Aldrich D9402-100FT Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.)
DOMO Pot with stailess, LCD DOMO Elektronic DO42325PC Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 ° C, operation LCD display
Hettich zentrifugen Universal 32 Gemini bv 2770 GS1R Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm
LT 3 shaking device Fischer Scientific 6470.0002 Orbital shaking device
KERN 440-47N Kern 440-47N Laboratory balance
KERN 770 Kern 770 -N Laboratory analytical balance
VENTICELL 222 – Komfort BMT, MMM Group C 131749 Drying oven, temperature control 30-100 ° C, air circulation control
Vacucell 55 – EVO BMT, MMM Group B 050328 Vacuum drying oven, temperature control 30-100 ° C
PULVERISETTE 19 Fritsch 19.1030.00 Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives
Multi Probe Adapter System MPA 5 Courage & Kazaka Electronic 10225237 MPA 5 Station – equipment for measurement hydratation, TEWL and pH
Skin pH-meter PH 905 probe Courage & Kazaka Electronic Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp
Corneometer CM 825 probe Courage & Kazaka Electronic Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum).
Tewameter TM 300 Courage & Kazaka Electronic Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL)
Heidolph RZR 2020 Heidolph 13-225-007-03-1 Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm
Heidolph mechanical stirrer BR 10 Heidolph Z336688-1EA Blade impeller crossed stirrer
Fagor FS 12 Fagor BTT-138 Laboratory refrigerator with freezer space
WTW bench pH/mV meter WTW Z313165 High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories
Container RPC Superfos 13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm
Name Company Catalog Number Comments
Software
Microsoft Office 2010 Microsoft
C+K software Courage and Khazaka Electronic GmbH MPA 5 station operating software

References

  1. United States Department of Agriculture – National Agricultural Statistics Services. . Poultry Slaughter, 2016 Summary. , (2016).
  2. McGovern, V. Recycling poultry feathers: more bang for the cluck. Environ.Health Perspect. 108 (8), A336-A339 (2000).
  3. Gousterova, A., et al. Degradation of keratin and collagen containing wastes by newly isolated thermoactinomycetes or by alkaline hydrolysis. Lett. Appl. Microbiol. 40 (5), 335-340 (2005).
  4. Yamauchi, K., Yamauchi, A., Kusunoki, T., Khoda, A., Konishi, Y. Preparation of stable aqueous solution of keratins, and physiochemical and biodegradational properties of films. Biomed. Mater. Res. 31 (4), 439-444 (1996).
  5. Schrooyen, P. M. M., Dijkstra, P. J., Oberthur, R. C., Bantjes, A., Feijen, J. Partially carboxymethylated feather keratins. 2. Thermal and mechanical properties of films. J. Agric. Food Chem. 49 (1), 221-230 (2001).
  6. Mark, H. F., Gaylord, N. G., Bikales, N. M. . Encyclopedia of Polymer Science Technology: vol. 8: Keratin to Modacrylic Fibers. , (1968).
  7. Bertsch, A., Cello, N. A biotechnological process for treatment and recycling poultry feathers as a feed ingredient. Bioresour. Technol. 96 (15), 1703-1708 (2005).
  8. Grazziotin, A., Pimentel, F. A., de Jong, E. V., Brandelli, A. Nutritional improvement of feather protein by treatment with microbial keratinase. Animal Feed Sci. Technol. 126 (1-2), 135-144 (2006).
  9. Brandelli, A. Bacterial keratinases: useful enzymes for bioprocessing agroindustrial wastes and beyond. Food Bioprocess Technol. 1 (2), 105-116 (2008).
  10. Gusta, R., Ramnani, P. Microbial keratinases and their prospective applications: an overview. Appl.Microbiol. Biotechnol. 70 (1), 21-33 (2006).
  11. Vasileva-Tonkova, E., Gousterova, A., Neshev, G. Ecologically safe method for improved feather wastes biodegradation. International Biodeterior & Biodegradation. 63 (8), 1008-1012 (2009).
  12. Lodén, M., Barel, A. O., Paye, M., Maibach, H. I. Hydrating Substance. Handbook of Cosmetic Science and Technology. , 107-119 (2009).
  13. Teglia, A., Secchi, G., Goddard, E. D., Gruber, J. V. Chapter 9: Proteins in Cosmetics. Principles of Polymer Science and Technology in Cosmetics and Personal Care. , (1999).
  14. Magdassi, S. Delivery systems in cosmetics. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 123-124, 671-679 (1997).
  15. Dahms, G., Jung, A. Method for producing a protein hydrolysate. U.S. Patent. , (2014).
  16. Pons, R., Carrera, I., Erra, P., Kunieda, G., Solans, C. Novel preparation methods for highly concentrated water-in-oil emulsions. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 91 (3), 259-266 (1994).
  17. Mokrejs, P., Hrncirik, J., Janacova, D., Svoboda, P. Processing of keratin waste of meat industry. Asian J. Chem. 24 (4), 1489-1494 (2012).
  18. Mokrejs, P., Svoboda, P., Hrncirik, J. Processing poultry feathers into keratin hydrolysate through alkaline-enzymatic hydrolysis. Waste Manage. Res. 29 (3), 260-267 (2011).
  19. Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P. Producing keratin hydrolysates from sheep wool. Orient. J. Chem. 27 (4), 1303-1309 (2011).
  20. Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P., Vasek, V. Modeling technological conditions for breakdown of waste sheep wool. Rasayan J. Chem. 4 (4), 728-735 (2011).
  21. Polaskova, J., Pavlackova, J., Vltavska, P., Mokrejs, P., Janis, R. Moisturizing effect of topical cosmetic products applied to dry skin. J. Cosmet. Sci. 64 (5), 329-340 (2013).
  22. Polaskova, J., Pavlackova, J., Egner, P. Effect of vehicle on the performance of active moisturizing substances. Skin Res. Technol. 21 (4), 403-412 (2015).
  23. Verdier-Sévrain, S., Bonté, F. Skin hydration: a review on its molecular mechanisms. J. Cosmet. Dermatol. 6 (2), 75-82 (2007).
  24. Darlenski, R., Sassning, S., Tsankov, N., Fluhr, J. W. Non-invasive in vivo methods for investigation of the skin barrier physical properties. Eur. J. Pharm. Biopharm. 72 (2), 295-303 (2009).
  25. Berardesca, E. EEMCO guidance for assessment of stratum corneum hydration: electrical methods. Skin Res. Technol. 3 (2), 126-132 (1997).
  26. Rogiers, V. EEMCO guidance for the assessment of transepidermal water loss in cosmetic sciences. Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. 14 (2), 117-128 (2001).
  27. Ali, S. M., Yosipovitch, G. Skin pH: from basic science to basic skin care. Acta Derm. Venereol. 93 (3), 261-267 (2013).
  28. Agache, P., Humbert, P. . Measuring the Skin. , (2004).
  29. Council for International Organizations of Medical Sciences. . International Ethical Guidelines for Biomedical Research Involving Human Subjects. , (2002).
  30. Ruland, J. K. Transdermal permeability and skin accumulation of amino acids. Int. J. Pharm. 72 (2), 149-155 (1991).
  31. Draelos, Z. D. Therapeutic moisturizers. Dermatol. Clin. 18 (4), 597-607 (2000).
  32. Courage and Khazaka Electronic GmbH, Technical Charges. . Information and Operating Instructions for the Multi probe Adapter MPA and its Probe. , (2013).

Play Video

Cite This Article
Mokrejš, P., Huťťa, M., Pavlačková, J., Egner, P. Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics. J. Vis. Exp. (129), e56254, doi:10.3791/56254 (2017).

View Video