We demonstrate the procedure for intra-tracheal inoculation of Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. This is a very useful tool to study signaling pathways that regulate airway inflammation in mouse models.
هنا، نحن تصف إجراءات تفصيلية لكفاءة وتسليم مباشرة المستدمية النزلية في المجاري التنفسية السفلى من الفئران. ونحن لشرح إجراءات إعداد ه. النزلية اللقاح، تقطير داخل القصبة الهوائية من H. النزلية في الرئة، وجمع السائل النزلة السنخ غسيل (BALF)، وتحليل الخلايا المناعية في BALF، وعزل الحمض النووي الريبي لتحليل التعبير الجيني المغاير. هذا الإجراء يمكن استخدامها لدراسة استجابة الرئة الالتهابية إلى أي بكتيريا، أو فيروس الفطريات. ويفضل القصبة الهوائية تقطير المباشر في الغالب على إجراءات الأنف أو استنشاق الهباء الجوي لأنها توفر أكثر كفاءة اللقاح البكتيري في الجهاز التنفسي السفلي مع أقل الغموض.
التهاب هو الآلية المناعية الأساسية للدفاع ضد العوامل المعدية. وهي تشجع القضاء على مسببات المرض وإصلاح الأنسجة التالفة. كما أنها تسهل عملية الانتعاش إلى حالة صحية طبيعية 1. ومع ذلك، والتهاب dysregulated غالبا ما يؤدي إلى الأمراض الالتهابية المزمنة 2. التهاب الشعب الهوائية هو السبب المبدئي للأمراض الرئوية مختلفة مثل مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD)، الربو وتليف رئوي 3.
ويرتبط عدم typeable (unencapsulated) المستدمية النزلية (NTHi) مع الأمراض الالتهابية العلوية والسفلية الرئة المزمنة 4،5. ومن الأنواع السائدة معزولة عن الشعب الهوائية أقل من الأطفال والبالغين الذين يعانون من الانسداد 4،6،7 أمراض الرئة المزمنة. وتتميز الاستجابة الالتهابية بعد الإصابة NTHi قبل upregulation من السيتوكينات proinflammatory (مثل TNF و IL-1β)، وتوسط ذلك بذ mitogen البروتين كيناز تفعيلها (MAPK) والنووي عامل كيلوبايت (NF كيلوبايت) من خلال مستقبلات تول مثل (TLRs) 8.
نماذج الماوس أدوات مفيدة جدا لتحليل الأمراض الكامنة وراء مرض التهاب الرئة بسبب توافر خطوط الجينات ناقصة مختلفة. وقد استخدمت عدة طرق لتطعيم البكتيريا الحية / الموهن والمنتجات البكتيرية، بما في ذلك تقطير الأنف ورذاذ 9،10 الاستنشاق. هنا، علينا أن نظهر داخل القصبة الهوائية تقطير. على الرغم من أن أقل استخداما، وهذا النهج هو أكثر كفاءة وتكرار للغاية نظرا للتسليم المباشر من اللقاح في الجهاز التنفسي السفلي.
هنا، نحن تصف الإجراء الفريد والغازية الحد الأدنى لتطعيم الرئتين من الفئران مع العوامل المسببة للأمراض الرئة البكتيري. علينا أن نظهر أن هذا الإجراء يمكن أن تستخدم لدراسة وظيفة الجينات المختلفة باستخدام الفئران التي تعاني من نقص في الجينات من مسارات الإشارات التهابا…
The authors have nothing to disclose.
We thank Dr. Carson Harrod for critical reading of the manuscript. We also thank Mr. Minghui Zeng and Drs. Mahesh Kathania and Prashant Khare for their contributions. This work was supported by grants from the American Cancer Society (Research Scholar grant, 122713-RSG-12-260-01-LIB) and the Sammons Cancer Center (Pilot Project grant) to K. Venuprasad.
Chocolate agar plate | Fisher Scientific | CAS50-99-7 | |
Dextrose Anhydrous | Themo Scientific | R01300 | |
Heparin | Hospira,Inc | RL-3010 | |
Deft quick solution | Sigma | GS500-500ML | |
Syringe needle 20/26G | BD | (REF305115/175) | |
Iml syringe | BD | REF 309602 | |
Catheter 20GA | BD | REF 381433 | |
Dissecting Scissors, straight, 10 cm long | kentscientific | INS600393 | |
Iris Forceps, serrated, 10cm long | kentscientific | INS650915 | |
Tweezer #5 Stainless steel, 11cm long | kentscientific | INS600095 | |
10% Formalin | Fisher Scientific | CAS 67-56-1 | |
Agarose | peqlab | 35-1020 | |
5ml polystyrene round-bottom tubes | BD | REF 352058 | |
1.5 ml Microcentrifuge tubes | Light Labs | A-7001-R | |
Reasy Mini kit | Qiagen | 74104 | |
Pellet pestile motor (Tissue homoginizer) | Sigma | Z359971-1EA | |
96 well microtiter plates V bottom | Thermo | 2605 | |
1X PBS | Gibco | 10010-023 | |
OneComp eBeads | eBioscience | 01-1111-42 | |
CD45.2-APC | eBioscience | 17-0454-81 | Working dilution 1:100 |
Ly-6G-eFlor 450 | eBioscience | 48-5931-82 | Working dilution 1:100 |
BSA | HyClone | SH30574.03 | |
RBC Lysis Buffer (10X) | Biolegend | 420301 | |
Live/Dead fixable aqua dead cell stain kit | Invitrogen | L-34957 | |
EDTA (0.5M) | lifetechnologies | 15575-020 | |
CD16/CD32 FcBlock | BD | 553142 | |
Facs tubes polystyrene round bottom tube | BD | 352052 | |
Formaldehyde | Polyscience | 4018 |