Summary

테스트<em> 초파리</emY-미로 분석과> 후각

Published: June 12, 2014
doi:

Summary

우리는 Y-미로 분석을 사용하여 초파리의 행동에 냄새 물질의 영향을 나타 내기 위해 선택 테스트를 제시한다.

Abstract

동물은 자신의 생존을 보장하는 환경에서 신호를 검출하는 것은 필수적이다. 이 목표로, 그들은 직접 접촉을 통해 이상 범위에서 동작하는 휘발성 분자에 대한 응답을 나타냅니다 후각을 통해, 같은 시각, mechanoreception, 청각, 맛을 통해 chemoperception 등의 환경 신호를 사용합니다. 휘발성 화학 분자 위험, 음식의 소스, 또는 개인 간의 통신의 검출에 대부분의 동물에 매우 중요한 신호입니다. 초파리는 후각의 세포 및 분자 기초를 탐구하는 과학자에 대한 가장 일반적인 생물학적 모델 중 하나입니다. 이 작은 곤충의 후각 능력을 강조하기 위해, 우리는 고전적인 마우스와 함께 사용되는 Y-미로 시험에 기초하여 수정 된 선택의 프로토콜을 설명합니다. Y-미로로 얻은 데이터는 더 나은 동물들은 끊임없이 변화하는 환경에 대처하는 방법을 이해하는 데 유용한 정보를 제공합니다. 우리는 공부를 단계별 프로토콜을 소개합니다이 Y-미로 분석을 사용하여 비행 탐색 응답에 냄새 물질의 영향.

Introduction

맛이나 후각을 통해 Chemoreception 동물의 생존을위한 중요한 감각 양상이다. 그것은 중요한 위험 또는 음식 소스의 검출에 필요한 신호뿐만 아니라 사회적 상호 작용을 제공한다. 또한 자신의 재생에 필요한 섹스 파트너를 찾기 위해 동물을하는 데 도움이됩니다. 20 년 이상, 노벨상은 "후각 수용체와 후각 시스템의 조직의 그들의 발견에 대해"2004 년 리처드 악셀과 린다 벅에 의해 작업 경력을 포함하여 집중적 인 연구는 분자 및 세포 기지를 나타 내기 위해 수행 된 후각, 2.

후각 인식을 해부하는 과학자의 마음에 드는 동물 모델 중 하나는 D.입니다 의 melanogaster. 이 곤충은 포유 동물과 유사한 세포 및 분자 냄새 코딩 전략을 공유한다. 과학계는이 과일 파리에있는 방향제의 역할을 연구하기 위해 다양한 행동 패러다임을 사용합니다. 이 테스트는 courtshi으로 복합 분석을 포함후각 등 다양한 감각 양식이, 남성의 구애 3을 유도하는 것이 중요합니다 P 테스트합니다. 다른 분석은 더 구체적 방향제의 역할을 해결하기 위해 개발되었다; 이들은 T-미로, Y-미로 트랩 분석, 4 개의 필드로 경기장과 바람 터널 4,5,6,7,8 있습니다.

이 문서에서 우리는 D를 사용하여 강력한 후각 응답을 제공하는 간단한 수정 된 Y-미로 분석을 제시 의 melanogaster. 우리의 셋업은 이전에 설명한 방법 9에 반대의 최종 팁을 사용합니다. 따라서, 우리의 Y-미로는 두 가지 장점이 있습니다. 파리가 그녀의 선택을 한 후에 첫째, 시스템의 반환을 방지 할 수 있습니다. 둘째, Y-미로의 모든 영역에서의 냄새 물질의 교환을 제한한다. 초파리는 종종 취제 포화를 방지하는 데 사용되는 공기 흐름에 매우 민감하기 때문에이 마지막 이점은 중요하다. 공기의 흐름과 실험 장치를 조정하려면 시간과 비용이 소모 될 것이다. 따라서, 우리의 Y-미로 분석은 EF를 나타냅니다ficient 초파리의 후각 성능을 테스트하는 빠른 방법.

Protocol

1. 시작하기 전에 안정적이고 강력한 행동 표현형 베어링 isogenized 기준 재고를 사용합니다. 모든 잠재적 인 컨트롤 이기종 배경 대립 유전자를 전달할 수 있기 때문에,이 주식을 선택에 대한 일반적인 규칙은 없다. 이후 단계에 필요한 다른 모든 주식을 역 교배이 컨트롤 변형을 사용합니다. 이 교잡 단계는 일반적으로 2 ~ 3 동질 기준 남성 5에 (가능한 횡단 오버 상동 염색?…

Representative Results

그림 1D이 Y-미로 분석을 사용하여 두 개의 대표적인 응답을 보여줍니다. 그들은 크게 10 % 페닐 아세트산을 피하지 않는 반면, 주-S의 남성은 강하게, 증류수에 희석하여 10 % 초산을 피하십시오. 이러한 분석은로드 유리 병에 함께 배치 복제 당 10 명의 남성을 기준으로합니다. 이 프로토콜은 때때로 평균의 큰 표준 오차가 발생할 수 있습니다. 필요하다면, 대신 단지 10. 수학적으로, 한 ?…

Discussion

우리의 Y-미로 프로토콜은 이전에 설명한 프로토콜 9를 기반으로합니다. 그러나, 우리는 두 가지 주요 차이점을 소개합니다. 첫째, 우리는 그들이 용매 또는 용매 플러스 악취 물질을 포함하는 유리 병에 입력하는 것을 결정하면 돌아가는 비행을 방지하기 위해 좁은 피펫 팁을 사용합니다. 이 좁은 팁은 Y-미로의 악취 물질의 확산을 제한하는 데 유용합니다. 둘째, 우리는 Y-미로에 입력하?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

우리는 원고를 개선하기 위해 자신의 작품에 대해 4 익명의 검토를 부탁드립니다. 우리는 MBG과 YG에 재정적 지원 센터 국립 드 라 공들인 Scientifique, 감사 및 MMS에 Université 드 부르고뉴 및 연구의 프랑스 교육부. YG의 실험실에서 연구는 유럽 연구위원회 (ERC 그랜트, GliSFCo-311403 시작), 직원은 국립 드 라 공들인 (ANR-JCJC, GGCB-2010), 헌법위원회 지역 드 부르고뉴 (페이버) 및 CNRS에 의해 투자된다.

Materials

Drosophila Polystyrene tube VWR europe 734-2255 30 x 25 mm 
Y-maze
Drosophila Borosilicate tube Dijon verre 95 X 25 mm
Y-maze
Foam stopper Dutscher 999038
Y-maze
Y-shaped connector Europrix 11020605
Y-maze
100-1000µl pipet tips Corning 4868 Join the following pipet tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipet tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ∼2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipet tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial.
Y-maze
Far-Red LED Bulb Rubin-Lacaque 0RB180238 625-630 nm
Acetic Acid Sigma-Aldrich 45725
Phenylacetic Acid Sigma-Aldrich P16621
Yeast Sensient Flavors Strasbourg 1018880464
Cornmeal eurogerm Farine de maïs
Agar Kalys HP-697-25
Methyl hydroxy 4 benzoate VWR international 25605293

References

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Cite This Article
Simonnet, M. M., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay. J. Vis. Exp. (88), e51241, doi:10.3791/51241 (2014).

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