Test<em> Drosophila</emBir Y-labirenti testi ile> koku alma
Summary
Biz Y-labirent testi kullanılarak Drosophila davranışı üzerindeki koku etkisini ortaya çıkarmak için bir seçim testi sunuyoruz.
Abstract
Hayvanlar onların hayatta kalmasını sağlamak için çevreden sinyalleri tespit esastır. Bu amaçla, onlar doğrudan temas yoluyla veya daha uzun mesafeden etkili bir uçucu moleküle yanıtı temsil olfaction, yoluyla, bu vizyon, mechanoreception, işitme ve tat ile chemoperception gibi çevresel ipuçlarını kullanın. Uçucu kimyasal moleküller tehlike, bir besin kaynağı, ya da bireyler arasında iletişim kurmak için saptanmasında çok hayvanlar için çok önemli sinyallerdir. Drosophila melanogaster olfaction hücresel ve moleküler temeli keşfetmek bilim adamları için en yaygın biyolojik modelleri biridir. Bu küçük böcek koku yeteneklerini vurgulamak amacıyla, klasik fareler ile birlikte kullanılan Y-labirenti testine göre bir tadil edilmiş bir seçim protokol açıklar. Y-labirentine ile elde edilen veriler daha iyi hayvanlar sürekli değişen çevre ile nasıl başa anlamak için değerli bilgiler verir. Biz çalışmak için bir adım-adım protokolü tanıtmakBu Y-labirent testi kullanılarak sinek keşif cevabına koku etkisi.
Introduction
Tat veya koku duyusunun aracılığıyla kemo-alış hayvan hayatta kalmak için önemli bir duyusal yöntemidir. Bu hayati bir tehlike veya gıda kaynaklarının tespiti için gerekli ipuçlarını, yanı sıra sosyal etkileşimleri için verir. Aynı zamanda onların üreme için gerekli bir seks partneri bulmak için hayvanlar olur. 20 yılı aşkın için, Nobel ödülü "odorant reseptörleri ve koku alma sisteminin organizasyonunun buluşları için" 2004 yılında Richard Axel ve Linda Buck tarafından çalışma kazanan dahil olmak üzere yoğun araştırma, moleküler ve hücresel üsleri ortaya çıkarmak için yapılmıştır olfaction 1,2.
Koku algısını incelemek için bilim adamları için favori hayvan modellerinden biri olan D. melanogaster. Bu böcek memeliler ile benzer hücresel ve moleküler koku kodlama stratejisi paylaşıyor. Bilimsel topluluk bu meyve sineği koku rolünü incelemek için çeşitli davranış paradigmaları kullanır. Bu testler, çok modlu courtshi gibi tahliller bulunmaktadırolfaction dahil olmak üzere çeşitli duyu modaliteleri, erkek iltifata 3 ortaya çıkarmak için önemli olan p testleri. Diğer deneyler, aynı zamanda daha özel olarak koku rolünü mücadele için geliştirilmiştir; bu T-labirentine, Y-labirentine, tuzak deneyleri, dört alan arenalarda ve rüzgar tünelleri 4,5,6,7,8 içerir.
Bu yazıda D. kullanarak sağlam koku yanıtları sağlayan basit bir modifiye Y-labirent testi, mevcut melanogaster. Bizim set-up daha önce açıklanan yönteme 9 aksine son ipuçlarını kullanır. Böylece, Y-labirenti iki avantajı vardır. Sinek kendi seçimini yapmış kez Birincisi, bu sistemde herhangi bir geri dönüş önler. İkinci olarak, Y-labirent tüm alanlarında koku değişimini sınırlar. Drosophila genellikle odorant doymasını önlemek için kullanılan hava akımına karşı çok hassas olduğu için, bu son avantaj önemlidir. Bir hava akışı ile deneysel set-up ayarlamak için zaman ve maliyet alıcı olacaktır. Bu nedenle, Y-labirenti deneyi temsil efşır ve Drosophila koku performansını test etmek için hızlı yolu.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bizim Y-labirenti protokol, önceden tanımlanmış bir protokole 9 dayanmaktadır. Ancak, iki önemli farklılıklar tanıtmak. İlk olarak, bu çözücü veya çözücü artı odorant ihtiva eden şişeye girmek için karar bir kez geri gelen sinekleri önlemek için dar bir pipet uçları kullanın. Bu dar ipuçları da Y-labirentte odorant difüzyon sınırlamak için yararlıdır. İkinci olarak, Y-labirent girmek için sinekleri zorlamak için daha küçük bir yükleme şişeyi kullanın. Bu sinekler b…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz el yazması geliştirmek için kendi iş için 4 anonim yorumcular teşekkür ederim. Biz MBD ve YG için mali destek için Centre National de la Recherche SCIENTIFIQUE teşekkür ve MMS Université de Bourgogne ve Araştırma Bakanlığı Fransız. YG Araştırma laboratuvarında Avrupa Araştırma Konseyi (ERC Grant, GliSFCo-311403 Başlangıç), Agence Nationale de la Recherche (ANR-JCJC, GGCB-2010), Conseil Régional de Bourgogne (Faber) ve CNRS tarafından finanse edilmektedir.
Materials
| Drosophila Polystyrene tube | VWR europe | 734-2255 | 30 x 25 mm Y-maze |
| Drosophila Borosilicate tube | Dijon verre | 95 X 25 mm Y-maze |
|
| Foam stopper | Dutscher | 999038 | Y-maze |
| Y-shaped connector | Europrix | 11020605 | Y-maze |
| 100-1000µl pipet tips | Corning | 4868 | Join the following pipet tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipet tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ∼2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipet tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial. Y-maze |
| Far-Red LED Bulb | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Phenylacetic Acid | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Yeast | Sensient Flavors Strasbourg | 1018880464 | |
| Cornmeal | eurogerm | Farine de maïs | |
| Agar | Kalys | HP-697-25 | |
| Methyl hydroxy 4 benzoate | VWR international | 25605293 |
References
- Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).
- Silbering, A. F., Benton, R. Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: ‘chance or design. EMBO Rep. 11, 173-179 (2010).
- Ziegler, A. B., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. The smell of love in Drosophila. Front. Physiol. 4, (2013).
- Silbering, A. F., et al. Complementary function and integrated wiring of the evolutionarily distinct Drosophila olfactory subsystems. J. Neurosci. 31, 13357-13375 (2011).
- Grosjean, Y., et al. An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila. Nature. 478, 236-240 (2011).
- Woodard, C., Huang, T., Sun, H., Helfand, S. L., Carlson, J. Genetic analysis of olfactory behavior in Drosophila: a new screen yields the ota mutants. 遗传学. 123, 315-326 (1989).
- Semmelhack, J. L., Wang, J. W. Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion. Nature. 459, 218-223 (2009).
- Budick, S. A., Dickinson, M. H. Free-flight responses of Drosophila melanogaster to attractive odors. The Journal of Experimental Biology. 209, 3001-3017 (2006).
- Martin, F., Charro, M. J., Alcorta, E. Mutations affecting the cAMP transduction pathway modify olfaction in Drosophila. J. Comp. Physiol. A. 187, 359-370 (2001).
- Barron, A. B. Anaesthetising Drosophila for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).
- Ai, M., et al. Acid sensing by the Drosophila olfactory system. Nature. 468, 691-695 (2010).
- Becher, P. G., Bengtsson, M., Hansson, B. S., Witzgall, P. Flying the fly: long-range flight behavior of Drosophila melanogaster to attractive odors. J. Chem. Ecol. 36, 599-607 (2010).
