Summary

Farelerde Tekrarlayan Herpetik Stromal Keratit, İnsan HSK Eğitim İçin Bir Model

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

Herpetik kornea hastalığı çalışmaların çoğu birincil enfeksiyon modeli kullanın. Ancak, HSV-1 ile birincil infeksiyon genellikle insan hastalığına yol açmaz. Burada daha yakından insan hastalığı taklit herpetik kornea hastalığı, tekrarlayan modeli açıklamak.

Abstract

Herpetik göz hastalığı, adlandırdığı herpetik stromal keratit (HSK), korneanın bir potansiyel olarak kör edici enfeksiyonu olduğunu tedavisi için 300.000 'den fazla klinik ziyaretleri her yıl sonuçları. Klinik hastalığı olanlarda 1 ila 2 oranında enfekte kornea görme kaybı yaşayacaksınız. Bu olguların büyük çoğunluğu herpes latent enfeksiyonun reaktivasyonu sonucu akut hastalık nedeniyle değil ben virüsü yazın ve simpleks. İlginç bir şekilde, akut enfeksiyon, genellikle bu hastalık incelemek için kullanılan bir modeldir. Ancak, HSK tekrarlayan modeli klinik hastalık sırasında ortaya ne daha yansıtıcı olacağını hissettim. HSK için tekrarlayan hayvan modellerinde tavşan ve fareler hem istihdam var. Tavşanların avantajı, ikinci gecikme reaktivasyon, bilinen herhangi bir uyarıcı yokluğunun ortaya çıkmasıdır. O tavşan modelinde immün yok çünkü birçok immünolojik faktörler tekrarlayan HSK oynadığı rol keşfetmek için zor olduğunu söylediFarenin sahip olduğu fizyolojik ve genetik kaynaklar. Reaktivasyonu UV-B ışığa maruz kalma ile tetiklenen çünkü biz orada pek çok kaynak mevcuttur olmanın avantajına sahiptir ve aynı zamanda reaktivasyonu ne zaman ortaya çıkacağını biliyoruz çünkü tekrarlayan HSK için fare modeli kullanmayı seçti. Bugüne kadar, bu model bu hastalık için önemli olan çeşitli immünolojik faktörlerin belirlenmesi amacıyla kullananlar laboratuarlar sağladı. Bu da bize tedavi ve aşı etkinliği hem sınamak için izin verdi.

Protocol

Hayvan Bakımı Not: anti-enflamatuar ve böylece örnek kılacak şekilde Analjezikler Bu modelde kullanılan değildir. 1. Virüs hazırlanması 3-4 gün için enfeksiyon, 0.01 çokluğu bir başlangıç ​​dilüsyonu (T-150 şişesi içinde, yaklaşık 5 x 10 5 plak oluşturan birim) kullanılarak Vero hücreleri (% 80 confluent) üzerinde, HSV-1 büyümek bütün hücre kadar yuvarlanır-up ve kolay bir şişeye isabet dışarı çıkarılması edilir. 4 s…

Discussion

Herpetik stromal keratit tekrarlayan modeli (HSK) burada açıklanan araştırmacı insan hastalık sırasında gözlenen edildiği şey ile daha tutarlı bir model insan HSK çalışma sağlar. Böylece, model güçlü hastalığı primer hastalık sırasında uyarılan tarafından zaten bir bağışıklık sistemi bağlamında oluşur vardır. Bu fareler zaten HSV-1 için bir immün yanıt olduğu için, bu bağışıklık yanıtını yeniden faktörler başlangıçta oluşturulan bu olanlardan büyük olasılıkla fa…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Yazarlar bize modeli öğretmek yardımcı olmak için Dr Jay Pepose teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Sağlık Hibeler EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) ve Göz Hastalıkları Anabilim Körlük Engellenir Araştırma sınırsız ödenekle Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

References

  1. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice. Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).
  2. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice. J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).
  3. Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system. J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).
  4. Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).
  5. Keadle, T. L., Stuart, P. M. IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis. Microbial Path. 38, 13-21 (2005).
  6. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice. J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).
  7. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice. Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).
  8. Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis. Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).
  9. Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. Microbial Path. 32, 255-262 (2002).
  10. Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection. J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).
  11. Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice. J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).
  12. Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection. Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).
  13. Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection. Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).
  14. Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis. Virology. 380, 46-51 (2008).
  15. Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways. J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).

Play Video

Cite This Article
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

View Video