Summary

Immunhistologische Markierung von Mikrotubuli in Sensory Neuron Dendriten, Tracheen und Muskeln in der Drosophila Larva Körperwand

Published: November 10, 2011
doi:

Summary

Um zu verstehen, wie komplex Zelle Formen, wie neuronalen Dendriten, während der Entwicklung erreicht werden, ist es wichtig, in der Lage sein, genau Assay Mikrotubuli Organisation. Hier beschreiben wir eine robuste immunhistologische Markierung Methode, um Mikrotubuli Organisation von dendritischen Verzweigung Neuron sensorischen Dendriten, Luftröhre, Muskeln zu untersuchen, und andere<em> Drosophila</em> Larve Körperwand Gewebe.

Abstract

Um zu verstehen, wie sich Unterschiede in komplexen Zelle Formen erreicht werden, ist es wichtig, genau zu verfolgen Mikrotubuli Organisation. Die Drosophila Larve Körper Wand enthält verschiedene Zelltypen, die Modelle, um Zellen und Gewebe Morphogenese Studie sind. Zum Beispiel Tracheen werden verwendet, um Rohr Morphogenese 1, und die dendritische Verzweigung (DA) sensorischen Neuronen der Drosophila Larve zu einem primären System für die Aufklärung der allgemeinen und Neuron-Klasse-spezifische Mechanismen der dendritischen Differenzierung 2-5 und Degeneration 6 prüfen .

Die Form der Dendriten Niederlassungen erheblich variieren kann zwischen Neuron Klassen und sogar zwischen verschiedenen Niederlassungen eines einzelnen Neurons 7,8. Genetische Studien in DA Neuronen lassen vermuten, dass Differential Zytoskelett-Organisation kann morphologischen Unterschiede in dendritische Verzweigung Form 4,9-11 zugrunde liegen. Wir bieten eine robuste immunologische Kennzeichnung Methode, um einessay in vivo Mikrotubuli Organisation in DA sensorischen Neurons Dendriten Laube (Abbildungen 1, 2, Movie 1). Dieses Protokoll zeigt die Zerlegung und Immunfärbung des ersten Stadiums Larve, eine Bühne, wenn sie aktiv sensorischen Neurons Dendriten Auswuchs und Verzweigung Organisation auftritt 12,13.

Neben Färbung sensorischen Neuronen erreicht diese Methode robust Kennzeichnung von Mikrotubuli Organisation in den Muskeln (Filme 2, 3), Luftröhre (Abbildung 3, Movie 3), und andere Körperteile Wand Gewebe. Es ist für die Ermittler wollen Mikrotubuli Organisation in situ Analyse in die Wand des Körpers bei der Untersuchung von Mechanismen, die wertvolle Kontrolle von Geweben und Zellen zu gestalten.

Protocol

1. Vorbereitung der Reagenzien Hinweise vor Beginn: Dissection und immunhistochemische Färbung sind in einem magnetischen Kammer durchgeführt und die Larve sich mit speziell geformten Insektennadeln merken. Detaillierte Anweisungen für den Bau eines magnetischen Kammer und Vorbereitung dieser Stifte können in Zusammenhang mit Verweisen 14,15 gefunden werden. Kurz gesagt, ist ein 1x1cm quadratisches Loch in ein magnetisches Blatt und einem Deckglas angebracht auf…

Discussion

Um zu verstehen, wie komplex Zellformen sind es erreicht ist wichtig in der Lage sein, genau Assay Mikrotubuli Organisation. Hier beschreiben wir eine robuste immunhistologische Markierung Methode Assay Mikrotubuli Organisation von dendritischen Verzweigung Neuron sensorischen Dendriten. Neben Färbung sensorischen Neuronen erreicht diese Methode robust immunhistologische Färbung der Luftröhre, Muskeln und andere Körperteile Wand Gewebe.

Wir verwenden dieses Protokoll, um Mikrotubuli Orga…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir bedanken uns bei RIKEN für die Finanzierung. P10-Gal4 war eine Art Geschenk Alain Vincent (Université Paul Sabatier, Toulouse, Frankreich).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue
number
Comments
(optional)
Forceps Dumont 11251-20  
Microscissors FST 15000-08  
Mouse anti-α-tubulin (Clone: DM1A) Sigma T9026 Dilution 1/1000
Mouse anti-Futsch (Clone: 22C10),
supernatant
Developmental
Studies
Hybridoma Bank
22C10 Dilution 1/1000
Rat anti-CD8 (Clone: 5H10) Caltag MCD0800 Dilution 1/1000
Alexa Fluor 488 anti-mouse IgG Invitrogen A-11001 Dilution 1/500
Cy3 anti-Rat IgG Jackson Immunoresearch 712-166-150 Dilution 1/200

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Yalgin, C., Karim, M. R., Moore, A. W. Immunohistological Labeling of Microtubules in Sensory Neuron Dendrites, Tracheae, and Muscles in the Drosophila Larva Body Wall. J. Vis. Exp. (57), e3662, doi:10.3791/3662 (2011).

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