Summary

Corti Memeli Organ hücre mimarisini Gelişmiş Koruma için Vibratome Kesit

Published: June 17, 2011
doi:

Summary

Immünhistokimya ve konfokal mikroskobu ile Corti organı, kesit vibratome basit bir prosedür açıklanmıştır. Bu prosedür, Corti memeli organı ince hücre mimarisini geliştirilmiş koruma sağlar ve dolayısıyla hücre tipleri doğru ölçümü için izin verir.

Abstract

Corti memeli organı mechanosensory saç ve nonsensory destekleyici hücrelerin yüksek sipariş hücresel bir mozaik
(1,2 gözden) bu hücresel mozaik Görselleştirme Corti organı genellikle kesitli olmasını gerektirir. Özellikle, çekirdekleri dorsalde saç hücreleri ile ilgili bulunmaktadır nonsensory ayağı ve Deiters hücreleri, Corti organı kesit alma görüntülendi olamaz. Ancak, sütun ve Deiters hücreleri ince sitoplazmik süreçleri de dahil olmak üzere, memeli Corti organı hassas hücre mimarisini, standart immünohistokimyasal boyama teknikleri ile uyumlu, parafin ve cryo-kesit gibi rutin histolojik prosedürleri korumak için zordur.

İşte ben konfokal mikroskobu ile takip koklea, tüm montaj bu vibratome bölümlerde immünohistokimyasal kesit vibratome oluşan basit ve sağlam bir prosedür açıklanmaktadır. Bu prosedür, fare bacak tomurcuk, zebrafish bağırsak, karaciğer, pankreas, ve kalp (seçilen örnekler için bkz: 3-6) de dahil olmak üzere birçok organı, immunhistochemical analizi için yaygın olarak kullanılmaya başlanmıştır. Buna ek olarak, bu yordamı Corti embriyo ve yetişkin farelerin 7 hem de mutant ve kontrol organları ayağı hücre sayısı hem de görüntüleme ve quantitificaton sucessful. Bu yöntem, ancak, şu anda yaygın olarak Corti memeli organı incelemek için kullanılan değildir. Corti yetişkin organ ince hücre mimarisini gelişmiş koruma sağlamak ve çeşitli hücre tipleri ölçümü için izin hem de bu işlem için potansiyel açıklanmıştır.

Protocol

1. Iç kulakları izolasyon ve sabitleme Corti organı hücresel desenlendirme analizi için, euthanize uygun embriyolar veya yetişkin düzenledi. Membranöz iç kulak içeren, otik kapsül parçalara ayır. Fare, bu embriyonik az (E) günlük 14.5 ve üstü, E0.5 vajinal fişi tespit edildiği gün embriyonlar üzerinde kolayca yapılabilir. Otik kapsül Diseksiyon orta hatta ve kafatasının açılması dekapitasyon ilk gerçekleştirilir. (Şekil 1A) her bir kulak maruz beyin çıkarın. İç ku…

Discussion

Immünhistokimya ve konfokal görüntüleme ile takip vibratome kesit, prosedür, minimal doku hasarı ile Corti organı görselleştirme sağlar. Açıkçası, vibratome bölümünde iç bölgelerinden alınan konfokal görüntüler sadece fiksasyon eserler ile sınırlıdır hücresel morfoloji mükemmel koruma göstermektedir. Ara sıra ayağı hücrelerinin sitoplazmik uzantıları sonları gibi hücresel kesintileri, (gösterilmemiştir) gözlemlenmesine rağmen yakın bir vibratome bölümü iki kesim yüzeyleri a…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Yazar agaroz boncuklar kullanarak bölümleri mount öneri konfokal mikroskopi ve Dr. Jian Zhang Çocuk Araştırma Enstitüsü Imaging Core kullanımı kabul etmek istiyorum. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, hibe DC010387 tarafından finanse edildi.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Leica VT1000S Vibrating Blade Microtome Leica    
Zeiss LSM510 laser scanning confocal microscope Zeiss    
Student Dumont #5 Forceps Fine Science Tools 91150-20  
UltraPure Low Melting Point Agarose Invitrogen 16520-050  
Peel-A-Way embedding mold Polysciences 18986 or 18646A  
bovine serum albumin Jackson ImmunoResearch 001-000-162  
Goat Serum Invitrogen 16210-064  
S100 Dako Z0311  
Alexa Fluor 568 goat anti-rabbit IgG Invitrogen A-11036 1:1000 dilution
Vectashield Vector Labs H-1000  
YO-PRO-1 Invitrogen Y3603  
vacuum grease Fisher S41718  
Affi-Gel Blue Gel Bio-Rad 153-7301  

References

  1. Lim, D. J. Functional structure of the organ of Corti: a review. Hear Res. 22, 117-146 (1986).
  2. Raphael, Y., Altschuler, R. A. Structure and innervation of the cochlea. Brain Res Bull. 60, 397-422 (2003).
  3. Chung, W. S., Shin, C. H., Stainier, D. Y. Bmp2 signaling regulates the hepatic versus pancreatic fate decision. Dev Cell. 15, 738-748 (2008).
  4. Sun, X., Mariani, F. V., Martin, G. R. Functions of FGF signalling from the apical ectodermal ridge in limb development. Nature. 418, 501-508 (2002).
  5. Trinh, L. A., Stainier, D. Y. Fibronectin regulates epithelial organization during myocardial migration in zebrafish. Dev Cell. 6, 371-382 (2004).
  6. Yin, C., Kikuchi, K., Hochgreb, T., Poss, K. D., Stainier, D. Y. Hand2 regulates extracellular matrix remodeling essential for gut-looping morphogenesis in zebrafish. Dev Cell. 18, 973-984 (2010).
  7. Shim, K., Minowada, G., Coling, D. E., Martin, G. R. Sprouty2, a mouse deafness gene, regulates cell fate decisions in the auditory sensory epithelium by antagonizing FGF signaling. Dev Cell. 8, 553-564 (2005).

Play Video

Cite This Article
Shim, K. Vibratome Sectioning for Enhanced Preservation of the Cytoarchitecture of the Mammalian Organ of Corti. J. Vis. Exp. (52), e2793, doi:10.3791/2793 (2011).

View Video