Journal
/
Biochemistry
/
Une analyse quantitative optimisée des protéines de liaison à l’ARN à l’aide d’ARN biotinylé court
JoVE Journal
Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
An Optimized Quantitative Pull-Down Analysis of RNA-Binding Proteins Using Short Biotinylated RNA
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Une analyse quantitative optimisée des protéines de liaison à l’ARN à l’aide d’ARN biotinylé court

DOI:
10.3791/64923-v

•

07:55 min

•

February 17, 2023

•

, , , ,
1Center for Human Technology,Italian Institute of Technology (IIT), 2Department of Experimental Oncology,European Institute of Oncology (IEO), 3Department of Biology and Biotechnologies ‘Charles Darwin’,Sapienza University of Rome

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:42Total Protein Harvest and Protein Concentration Determination
  • 01:48Bead Preparation
  • 03:12Bead Loading and Protein Binding on Beads
  • 04:13Washing of Nonspecific Binders
  • 04:53Elution of Specific Binders
  • 05:39Results: Quantification and Validation of Protein Interactors of Specific RNA Sequences
  • 07:24Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Ici, nous présentons une méthode in vitro optimisée pour découvrir, quantifier et valider les interacteurs protéiques de séquences d’ARN spécifiques, en utilisant l’extrait protéique total de cellules humaines, des billes de streptavidine recouvertes d’ARN biotinylé et une analyse par spectrométrie de masse.

Tags

RNA-binding ProteinsPull-down AnalysisBiotinylated RNAProtein ComplexesHEK 293T CellsLysis BufferMagnetic BeadsYeast TRNARNA Oligonucleotide

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Isolement de lipoprotéines de haute densité pour les non-codant petit ARN Quantification

Un protocole optimisé pour la mobilité électrophorétique Maj Assay utilisant Oligonucleotides infrarouge Fluorescent Dye marqués

Une méthode efficace pour l'isolement de l'ARN hautement purifiées de semences pour une utilisation dans quantitative transcriptome Analyse

Purification des protéines de surface cellulaire biotinylées de<em> Rhipicephalus microplus</em> Cellules intestinales épithéliales

Protocole optimisé pour l'extraction de protéines à partir de la soupape mitrale humaine

Préparation de l’échantillon d’Identification basé sur la spectrométrie de masse des régions de liaison à l’ARN

Capture et Identification des protéines de liaison à l’ARN à l’aide de Click chimie assistée par ARN-interactome Capture stratégie (CARIC)

PeptiQuick, une incorporation en une seule étape des protéines de membrane dans les Peptidiscs biotinylated pour les essais de liaison de protéine rationalisés

Analyse en chaîne de l’ubiquitine par surveillance parallèle des réactions

Sectionnement transversal du riz mature (Oryza sativa L.) Noyaux pour l’imagerie par microscopie électronique à balayage à l’aide d’embouts de pipette comme support d’immobilisation

Read Article