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真核細胞からのトランスレーショナル複合体の迅速な インビボ 固定と分離
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Rapid In Vivo Fixation and Isolation of Translational Complexes from Eukaryotic Cells
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真核細胞からのトランスレーショナル複合体の迅速な インビボ 固定と分離

日本語

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14:29 min

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December 25, 2021

DOI:

10.3791/62639-v

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10.3791/62639-v

•

14:29 min
December 25, 2021

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1Division of Genome Sciences and Cancer, The John Curtin School of Medical Research,The Australian National University, 2Centre for Advanced Microscopy,The Australian National University, 3Victor Chang Cardiac Research Institute

Summary

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生きた酵母や哺乳動物細胞におけるホルムアルデヒド架橋を用いた翻訳(タンパク質生合成)複合体を迅速に安定化させる技術を紹介する。このアプローチにより、一過性の中間体と動的RNA:タンパク質相互作用の解剖が可能になります。架橋された複合体は、深いシーケンシングベースのプロファイリング方法、顕微鏡、質量分析など、複数のダウンストリームアプリケーションで使用できます。

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In Vivo FixationTranslational ComplexesEukaryotic CellsRapid ChillingFormaldehyde FixationGlycine QuenchingCell LysisRibosomal FractionsAffinity PurificationRNA AnalysisMass SpectrometryYeast CultureExponential Growth PhaseFormaldehyde ConcentrationFixation TimeCell PelletingGlycine Buffer

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Janapala, Y., Woodward, K., Lee, J., Rug, M., Preiss, T., Shirokikh, N. E. Rapid In Vivo Fixation and Isolation of Translational Complexes from Eukaryotic Cells. J. Vis. Exp. (178), e62639, doi:10.3791/62639 (2021).

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