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September 18, 2019
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Hier wird ein Protokoll zur Durchführung der einmolekularen Förster-Resonanzenergieübertragung zur Untersuchung der HJ-Auflösung vorgestellt. Zur Bestimmung der Dissoziationskonstanten wird eine zweifarbige Wechselanregung verwendet. Einfarbigezeitraffe smFRET wird dann in Echtzeit-Spaltungstests angewendet, um die Verweilzeitverteilung vor hj-Auflösung zu erhalten.
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Single-moleculeFörster Resonance Energy Transfer (FRET)Holliday JunctionGEN1Real-time InvestigationEnzymatic SystemsSingle-molecule MethodsBiomolecular InteractionsOptical And Force MeasurementsSingle-channel Flow CellQuartz SlideDouble Adhesive SheetPolytetrafluoroethylene TweezersPolyethylene TubingEpoxy GlueAvidinPBS
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Sobhy, M. A., Bralić, A., Raducanu, V., Tehseen, M., Ouyang, Y., Takahashi, M., Rashid, F., Zaher, M. S., Hamdan, S. M. Single-Molecule Förster Resonance Energy Transfer Methods for Real-Time Investigation of the Holliday Junction Resolution by GEN1. J. Vis. Exp. (151), e60045, doi:10.3791/60045 (2019).
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