Journal
/
Genetics
/
Un protocollo per la produzione di vettori lentivirali integrasi-carenti per CRISPR/Cas9-mediata Knockout del Gene nelle cellule in divisione
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Un protocollo per la produzione di vettori lentivirali integrasi-carenti per CRISPR/Cas9-mediata Knockout del Gene nelle cellule in divisione

DOI:
10.3791/56915-v

•

10:42 min

•

December 12, 2017

•

,
1Duke Viral Vector Core, Department of Neurobiology,Duke University School of Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:52Transfecting of HEK-293T Cells Using Calcium Phosphate
  • 02:19Harvesting Virus
  • 02:50Concentration of Viral Particles by Ultracentrifugation
  • 05:11Esimating of Viral Titers Using p24-enzyme-linked Immunosorbent Assay
  • 07:31Counting GFP-positive Cells
  • 08:25Results: Production and Validation of the Knockout-efficiency of Integrase-deficient Lentiviral-CRSPER/Cas9 Vector
  • 09:57Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Descriviamo la strategia di produzione di vettori lentivirali integrasi-carente (IDLVs) come veicoli per la consegna di CRISPR/Cas9 alle cellule. Con una capacità di mediare rapido e robusto gene modifica nelle celle, IDLVs presentare una più sicura e piattaforma altrettanto efficace vettore per la consegna del gene rispetto ai vettori integrasi-competente.

Tags

Integrase-deficient Lentiviral VectorsCRISPR/Cas9Gene EditingHEK-293T CellsTransfectionSucrose GradientUltracentrifugation

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Usando una tecnica fluorescente PCR-capillare elettroforesi su gel al genotipo CRISPR / Cas9 mediata Knockout Mutants in un formato high-throughput

Selezione-dipendente e generazione indipendente di CRISPR / Cas9-mediata Gene Knockouts nelle cellule di mammiferi

Un protocollo universale per gRNA su larga scala produzione di libreria da qualsiasi fonte di DNA

Integrazione mirata CRISPR/Cas9-mediata In Vivo usando una strategia basata su unendo fine omologia-mediata

Produzione efficiente e identificazione di CRISPR/Cas9-generato Gene Ko nel sistema modello Danio rerio

Produzione e purificazione di Baculovirus per applicazione di terapia genica

Rottura del Gene altamente efficiente di cellule progenitrici ematopoietiche Murine ed umane di CRISPR/Cas9

Produzione di topi transgenici mediata lentivirali: un metodo semplice ed altamente efficiente per uno studio diretto dei fondatori

Identificazione di High-throughput di sequenze regolatorie del Gene mediante sequenziamento di nuova generazione di cromosoma circolare conformazione catturare (4C-seq)

Applicazione in vivo del sistema di controllo remoto per la manipolazione dell'espressione genica endogena

Read Article