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CRISPRコンカテマーを用いたマウス小腸オルガノイドにおける複数の遺伝子ノックアウトのためのプロトコル
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A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer
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CRISPRコンカテマーを用いたマウス小腸オルガノイドにおける複数の遺伝子ノックアウトのためのプロトコル

日本語

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11:53 min

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July 12, 2017

DOI:

10.3791/55916-v

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10.3791/55916-v

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11:53 min
July 12, 2017

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1Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute,University of Cambridge, 2Department of Genetics,University of Cambridge, 3Department of Pathology,Yonsei University College of Medicine

Summary

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このプロトコルは、CRISPR / Cas9技術を用いたマルチ遺伝子ノックアウトの作成に特に有用な、1つのガイドRNAコンカテマーベクターに複数の単一ガイドRNAをクローニングするための工程を記載する。腸オルガノイドにおける二重ノックアウトの生成は、この方法の適用可能性として示されている。

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CRISPR-concatemerMultiple Gene KnockoutMouse Small Intestinal OrganoidsCRISPRGuide RNAsElectroporationSimultaneous KnockoutLoss Of Function StudiesParallel CompensationCloningBbs1 Shuffling ReactionThree GRNA ConcatemerFour GRNA Concatemer

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Merenda, A., Andersson-Rolf, A., Mustata, R. C., Li, T., Kim, H., Koo, B. A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer. J. Vis. Exp. (125), e55916, doi:10.3791/55916 (2017).

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