Os íons de cálcio desempenham um papel integral na função dos neurônios: eles agem como sinais intracelulares que podem obter respostas como expressão genética alterada e liberação de neurotransmissores de vesículas sinápticas. Dentro da célula, a concentração de cálcio é altamente dinâmica devido à presença de bombas que transportam seletivamente esses íons em resposta a uma variedade de sinais. A imagem de cálcio aproveita o fluxo de cálcio intracelular para visualizar diretamente a sinalização de cálcio em neurônios vivos.
Este vídeo começa com uma visão geral dos reagentes-chave usados para esta técnica, conhecidos como corantes indicadores de cálcio. A discussão inclui uma introdução ao corante comumente utilizado Fura-2 e alguns princípios básicos por trás de como funcionam indicadores de cálcio ratiométrico e não-ratiométrico. Em seguida, é apresentado um típico experimento de imagem de cálcio, desde o preparo das células e corante até a captura e análise das imagens fluorescentes. Finalmente, são fornecidas várias aplicações experimentais de imagem de cálcio, como o estudo da atividade da rede neuronal e do processamento sensorial.
Procedure
A imagem de cálcio é uma técnica extremamente útil para investigar a variedade de papéis que os íons de cálcio têm no funcionamento dos neurônios. Íons de cálcio geram uma infinidade de sinais intracelulares que controlam funções-chave, como a liberação de neurotransmissores de vesículas sinápticas. Os métodos de imagem de cálcio permitem a medição direta do fluxo dinâmico de cálcio dentro dos neurônios e do tecido neuronal. Este vídeo fornece uma visão geral de como os corantes indicadores de c?…