أكثر من نصف البروتينات هي بروتينات صغيرة (الكتلة الجزيئية <200 كيلو دالتون) التي تم تحدي لكل من الإلكترون التصوير المجهر وإعادة بناء ثلاثية الأبعاد. الأمثل تلطيخ السلبية هو بروتوكول قوية وعالية الإنتاجية للحصول على صور عالية التباين والبروتينات غير المتماثلة الصغيرة أو المجمعات تحت الظروف الفسيولوجية المختلفة مرتفعة نسبيا القرار (~ 1 نانومتر).