Otimizando técnicas urodinâmicas de camundongos para maior precisão
Özet
Este protocolo fornece um guia para impermeabilizar a pele com cianoacrilato para evitar a absorção de urina pelo e pela pele. Inclui instruções para aplicar a cola na pele, implantar um cateter vesical e eletrodos para cistometria e registros de eletromiografia do esfíncter uretral externo em camundongos acordados.
Abstract
A medição precisa dos parâmetros urinários em camundongos acordados é crucial para entender a disfunção do trato urinário inferior (LUT), particularmente em condições como lesão neurogênica da medula espinhal pós-traumática (LME). No entanto, a realização de registros de cistometria em camundongos apresenta desafios notáveis. Quando os camundongos estão em uma posição propensa e restrita durante as sessões de gravação, a urina tende a ser absorvida pelo e pela pele, levando a uma subestimação do volume miccional (VV). O objetivo deste estudo foi aumentar a precisão dos registros de cistometria e eletromiografia do esfíncter uretral externo (EUS-EMG) em camundongos acordados. Desenvolvemos um método exclusivo utilizando adesivo de cianoacrilato para criar uma barreira cutânea à prova d’água ao redor do meato uretral e do abdômen, impedindo a absorção de urina e garantindo medições precisas. Os resultados mostram que, após a aplicação do cianoacrilato, a soma de VV e VR permaneceu consistente com o volume de solução salina infundida, e não foram observadas áreas úmidas após o experimento, indicando prevenção bem-sucedida da absorção de urina. Além disso, o método estabilizou simultaneamente os eletrodos conectados ao esfíncter uretral externo (EUS), garantiu sinais de eletromiografia (EMG) estáveis e minimizou os artefatos causados pelo movimento do camundongo acordado e pela manipulação do experimentador. Detalhes metodológicos, resultados e implicações são discutidos, destacando a importância de melhorar as técnicas urodinâmicas na pesquisa pré-clínica.
Introduction
O armazenamento e a liberação de urina dependem da atividade coordenada da bexiga urinária e do esfíncter uretral externo (USE). Em algumas patologias, como a bexiga neurogênica, tanto os músculos detrusores da bexiga quanto o esfíncter podem se tornar disfuncionais, levando a problemas vesicais significativos, especialmente após lesão medular traumática (LM)1.
Pequenos roedores são comumente usados como modelo experimental para estudar a função pré-clínica do trato urinário inferior (LUT)2. As técnicas de registro de cistometria de enchimento (FC) e eletromiografia EUS (EUS-EMG) podem fornecer informações objetivas precisas, dependendo da escolha dos métodos, medição precisa e interpretação dos resultados3. Os testes urodinâmicos são comumente usados para avaliar o volume miccional (VV), a eficiência miccional (VE) e a capacidade vesical4. O VE mede a eficácia com que a bexiga pode se esvaziar. É calculado dividindo o volume miccional pela soma dos volumes anulados e residuais (VV+RV). Por outro lado, a capacidade vesical é calculada somando-se o VV (a quantidade de urina expelida durante a micção) ao VD (a quantidade de urina deixada na bexiga após a micção)5. Portanto, a medição de VV e VR são as chaves para deduzir outros parâmetros.
Medir com precisão o VV em camundongos durante testes urodinâmicos apresenta vários desafios. A urina dos roedores, quando fisicamente contida em decúbito ventral, tende a ser puxada para baixo através da parede abdominal ventral devido à influência da gravidade6. Esse fenômeno pode levar à absorção de urina pelo e pele abdominais, o que, por sua vez, subestima o volume de urina excretado. Considerando a pequena quantidade de urina produzida por camundongos, o impacto dessa absorbância na precisão dos resultados é ainda mais pronunciado7. Além disso, em modelos de LM, o VV é frequentemente menor do que em camundongos normais devido ao impacto da dissinergia do esfíncter detrusor (DSD), que aumenta o risco de pressões de pontos de vazamento e absorção de urina pelopêlo 8. Esses fatores têm um impacto significativo nos resultados. Portanto, a medição precisa de VV e RV durante estudos urodinâmicos terminais em camundongos é crucial9. Atualmente, há uma falta de detalhes nas metodologias fornecidas na literatura publicada sobre como medir o volume de urina com precisão em modelos de camundongos.
O adesivo de cianoacrilato é um tipo de cola comumente utilizada em procedimentos cirúrgicos em modelos humanos e animais devido às suas propriedades de colagem rápida e eficaz 10,11,12. Esse adesivo é particularmente útil para fechar feridas e lacerações, pois forma uma ligação forte e flexível quando aplicado na pele13. Além disso, pode ser uma grande barreira contra a urina e a umidade que podem entrar em contato com pelos e feridas11.
Neste artigo, desenvolvemos uma técnica nova e econômica que utiliza adesivo de cianoacrilato para obter resultados precisos em registros de cistometria e EUS-EMG em camundongos acordados. Este método será benéfico para entender as causas subjacentes da disfunção da bexiga e desenvolver tratamentos mais eficazes para distúrbios da LUT.
Protocol
Representative Results
Discussion
Esta técnica urodinâmica descreve um procedimento aprimorado para medir o volume de urina e o sinal EUS-EMG em camundongos acordados e contidos. A presença de pêlos ao redor do meato uretral e da área abdominal pode interferir na precisão da medição da VV pela absorção da urina. Embora o pêlo ao redor do meato uretral e do abdômen tenha sido cuidadosamente raspado antes da cirurgia, os pequenos pêlos restantes dentro dessas áreas e a pele ainda absorveram a urina, geralmente deixando uma área úmida no abd…
Açıklamalar
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudo foi apoiado pelo NIH-NINDS (R21NS130241), IND DEPT HLTH (55051, 74247, 74244) e US ARMY (HT94252310700).
Materials
| Accelerator | BOB SMITH INDUSTRIES | BSI-152 | |
| Cyanoacrylate | TED PELLA, Inc | 14478 | |
| Disposable base mold | TED PELLA, Inc | 27147-4 | |
| Infusion pump | Harvard Apparatus PHD ULTRA | 70-3006 | |
| Isoflurane | Henry Schein Inc | 1182097 | |
| PIN | World Precision Instruments | 5482 | |
| Polyethylene Tubing 30 | Braintree Scientific Inc | PE30 | |
| Sterile Weighing Boat | HEATHROW SCIENTIFIC | 797CK2 | |
| Windaq/Lite | DATAQ INSTRUMENTS | 249022 |
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