Usando uma injeção de rastreador de células para investigar a origem de células formadoras de neointima em um modelo de parede lateral saccular de rato
Özet
Realizamos uma injeção de traço de células lipofílicas de um ponto para rastrear células endoteliais, seguida de uma arteriotomia e sutura de aneurismas de parede lateral na aorta do rato abdominal. A formação de neointima parecia dependente da artéria parental em aneurismas descelularizados e foi promovida pelo recrutamento de células de parede de aneurisma em paredes vitais ricas em células.
Abstract
O recorte microcirúrgico cria uma barreira subsequente do fluxo sanguíneo em aneurismas intracranianos, enquanto o tratamento endovascular depende da formação de neointima e trombo. A fonte de células endoteliais que cobrem a camada endoluminal da neointima permanece incerta. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar a origem das células formadoras de neointima após a injeção de rastreador de células no já bem estabelecido modelo de aneurisma de parede lateral de helsinque.
Os aneurismas sidewall foram criados por bolsas arteriais suturadas ou vitais de ponta a ponta até a aorta em ratos machos de Lewis. Antes da arteriotomia com sutura de aneurisma, foi realizada uma injeção de rastreador de células contendo corante CM-Dil na aorta fixada para rotular células endoteliais no vaso adjacente e rastrear sua proliferação durante o seguimento (FU). Tratamento seguido de enrolamento (n = 16) ou stent (n = 15). Na FU (7 dias ou 21 dias), todos os ratos foram submetidos à angiografia de fluorescência, seguidos de colheita de aneurisma e avaliação macroscópica e histológica com contagem de células imunohistológicas para regiões específicas de interesse.
Nenhum dos 31 aneurismas se rompeu após o acompanhamento. Quatro animais morreram prematuramente. A perfusão macroscopicamente residual foi observada em 75,0% enroladas e 7,0% de ratos stents. A quantidade de células-rastreadas-positivas foi significativamente elevada em stent descelular em comparação com aneurismas enroladas em relação ao trombo no dia 7 (p = 0,01) e neointima no dia 21 (p = 0,04). Não foram encontradas diferenças significativas em trombos ou neointima em aneurismas vitais.
Esses achados confirmam padrões de cura piores em enrolados em comparação com aneurismas stented. A formação de neointima parece particularmente dependente da artéria parental em aneurismas descelularizados, enquanto é apoiada pelo recrutamento de células de parede de aneurisma em paredes vitais ricas em células. Em termos de tradução, o tratamento de stent pode ser mais apropriado para aneurismas altamente degenerados, enquanto o enrolamento sozinho pode ser adequado para aneurismas com paredes de vasos mais saudáveis.
Introduction
A hemorragia subaracnóide causada pela ruptura de um aneurisma intracraniano (IA) é uma condição neurocirúrgica devastadora associada à alta morbidade e mortalidade 1,2,3,4. Além do recorte microcirúrgico, que fornece contato direto entre endotélio endotélio endotélio, os dispositivos endovasculares ganharam cada vez mais importância nas últimas décadas para o tratamento de IAs rompidas e descobertas incidentalmente. A resposta de cura em IAs tratadas endovascularmente depende principalmente da formação de neointima e da organização do trombo. Ambos são processos sinérgicos, dependendo da migração celular do vaso adjacente e da parede do aneurisma. 5 Até o momento, a origem das células endoteliais na formação neointima de aneurismas tratados endovasculares permanece incerta. Há um debate em curso na literatura sobre a fonte a partir da qual as células formadoras de neointima são recrutadas.
Utilizando-se uma injeção de corante CM-Dil (ver a Tabela de Materiais) na aorta abdominal de ratos, tivemos como objetivo analisar o papel das células endoteliais, originárias da artéria parental, na formação de neointima em dois pontos de tempo diferentes de FU (dia 7 e dia 21) (Figura 1). Uma vantagem do modelo é a incubação direta local de rastreador de células in vivo em uma artéria parental antes da sutura do aneurisma, permitindo a FU em pontos de tempo posteriores. Técnicas de injeção in vivo , como a incubação de rastreadores de células, não foram descritas na literatura. Uma vantagem dessa técnica é a injeção direta, de um ponto, intraoperatória, in vivo , que torna o modelo robusto e reprodutível.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este estudo demonstra que a formação de neointima é mediada através de células endoteliais originárias da artéria parental do complexo aneurisma, mas é apoiada pelo recrutamento de células derivadas da parede do aneurisma em aneurismas vitais. No entanto, o papel das células progenitoras circulantes na cura do aneurisma permanece controverso12,13. No total, 31 ratos de Lewis foram incluídos nesta investigação; apenas 4 morreram prematuramente (12,9% …
Açıklamalar
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem a Alessandra Bergadano, DVM, PhD, pela supervisão dedicada da saúde animal a longo prazo. Este trabalho foi apoiado pelos fundos de pesquisa do Conselho de Pesquisa, Kantonsspital Aarau, Aarau, Suíça, e da Fundação Nacional de Ciência snf (310030_182450).
Materials
| 3-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP428G | |
| 4-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | G0762563 | |
| 6-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | C0766070 | |
| 9-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | G1111140 | |
| Atipamezol | Arovet AG, Switzerland | ||
| Bandpass filter blue | Thorlabs | FD1B | any other |
| Bandpass filter green | Thorlabs | FGV9 | any other |
| Bipolar forceps | any other | ||
| Bicycle spotlight | any other | ||
| Board (20 x 10 cm) | any other | ||
| Buprenorphine | Indivior, Switzerland | 1014197 | |
| Camera | Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan | ||
| Cannula (27-1/2 G) | any other | ||
| Cell count software | Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/ | ||
| CellTracker CM-Dil dye | ThermoFisher SCIENTIFIC, USA | C7000 | |
| Coil-Device | Styker, Kalamazoo, MI, USA | 2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter | |
| Desinfection | any other | ||
| Eye-lubricant | any other | ||
| Fentanyl | Sintetica, S.A., Switzerland | 98683 | any generic |
| Flumazenil | Labatec-Pharma, Switerzland | ||
| Fluoresceine | Curatis AG | 5030376 | any generic |
| Fluorescence microscope | Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8 | ||
| Foil mask | any other | ||
| Glucose (5%) | any other | ||
| Heating pad | Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England | any other | |
| Isotonic sodium chloride solution (0.9%) | Fresenius KABI | 336769 | any generic |
| Isoflurane | any generic | ||
| Longuettes | any other | ||
| Meloxicam | Boehringer Ingelheim | P7626406 | any generic |
| Medetomidine | Virbac, Switzerland | QN05CM91 | |
| Micro needle holder | any other | ||
| Midazolam | Roche, Switzerland | ||
| Monitoring-system | Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States | ||
| Needle holder | any other | ||
| O2-Face mask | any other | ||
| Operation microscope | OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany | any other | |
| Oxygen | any other | ||
| Rectal temperature probe | any other | ||
| Scalpell | Swann-Morton | 210 | any other |
| Small animal shaver | any other | ||
| Smartphone | any other | ||
| Sodium dodecyl sulfate (0.1%) | Sigma-Aldrich | 11667289001 | |
| Soft feed | Emeraid Omnivore | any generic | |
| Soft tissue forceps | any other | ||
| Soft tissue spreader | any other | ||
| Stainless steel sponge bowls | any other | ||
| Stent-Device | Biotroni, Bülach, Switzerland | modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter | |
| Sterile micro swabs | any other | ||
| Straight and curved microforceps | any other | ||
| Straight and curved microscissors | any other | ||
| Straight and curved forceps | any other | ||
| Surgery drape | any other | ||
| Surgical scissors | any other | ||
| Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL | any other | ||
| Tape | any other | ||
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Yasargil titan standard clip (2x) | B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland | FT242T | temporary |
Referanslar
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