このプロトコル記述除去および Swan-ganz カテーテルのバルーン ヒントに準拠して、右心カテーテル検査中に肺動脈に挟まがまま肺動脈内皮細胞 (PAECs) の精製に付着、デフレートバルーン患者の体内からの除去に続きます。
さまざまな病態は肺高血圧症 (PH), 平均肺動脈圧が安静時 25 mmHg を超えると定義されるに します。さらに診断して PH を管理、患者は繰り返し右心における (迎え) 前記 Swan-ganz カテーテル、肺動脈の枝に高度なカテーテル先端部をくさびにバルーンを膨張を受けます。この記事では、という肺動脈内皮細胞 (PAECs) を迎え後に、スワン ・ ガンツ ・ カテーテルのバルーン ヒントから収穫し、推定 PAECs を浄化する抗 CD146 親和性列法による精製がプロトコルを示しています。これらの細胞は、迎え時に得られる血行動態の測定を補完するために肺の血管内皮細胞の生物学的状態の場でのスナップショットを提供するために使用可能性があります。収穫し、いずれかの細胞培養またはフロー cytometery など後続の分析アッセイ精製 PAECs を使用可能性があります。
現在の米国と欧州のガイドライン1肺高血圧症の診断のため右心カテーテル検査が必要です。医者および科学者のこの病気を理解しようとして迎え中に収集血行動態データを補完するために肺の血管から試料を望みます。残念ながら、肺血管生検に関連するリスクが非常に高い、したがって肺の血管系の生体試料、ほとんどこれまで迎えを受けて生きている患者から得られた場合。多くの洞察力をから得た死体から得られた肺の血管組織や explanted 肺、これらのサンプルがそれは生きた患者で繰り広げられる PH 病気プロセスの生物学を反映するようにことができます。2013 年に我々 はまず肺動脈内皮細胞 (PAECs) を迎え中、Swan-ganz カテーテルのバルーン ヒントと物理的な接触によって肺動脈の枝から全部落とすカテーテル先端から小さな数字で回復できると報告後の手順2。
この記事は、右心カテーテル検査の後 Swan-ganz カテーテルのバルーン ヒントから除去および肺動脈内皮細胞 (PAECs) の浄化のための技術を示します。これまで、この収穫方法を実行するための方法論は、文学研究室のテクニックを実行する間一貫した結果を確保するために十分な詳細に記載されています。この資料では、浄化された CD146 + 内皮細胞の最終製品にカテーテル先端のベッドサイドのコレクションから、技術の可視化のデモを提供している、この欠乏を克服するために。この技術必要があります ph, 様々 な病因の病理学に研究を進める上での援助、迎え時に収集した血行動態データを補完するために新しい診断法の開発に至る。
肺血管医学研究の分野にこのテクニックの重要性はそれが explanted または死体肺の肺血管内皮細胞の in situ と以前の研究と対照をなしての生物学のスナップショットへのアクセスを提供しますを表さない被写体の肺のエンドポイントです。最近では、我々 はこれらの細胞におけるアポトーシス マーカーより正確に表現型解析の有用性があることを示されている関連肺高血圧症の3品種。得られた細胞の収量は比較的小さく、~ 5, 000 25,000 1 サンプルあたりの PAECs とこれらの細胞が困難 (不可能ではない) の文化に。巧妙な臨床医および研究者が肺血管研究、診断、故障予測を進めるためにこれらの仲間の技術間のシナジー効果を見つけることと考えています。
この資料で説明する手法は、肺の血管内皮細胞を研究するため実験的パラダイムを以前のコンテキストで最高感謝です。人間から PAECs を取得する以前の試みは短命カテーテル肺動脈生検6の能力を開発しようと仔/死体肺5に限られています。最近レビュー7で説明したように、本手法は肺組織の収穫から人間生活から PAECs を取得し、病気や治療の進行の複数の時点でそう能力によって区別されます。ただし、そのコンパニオン技術最近報告されている誘導という多能性幹細胞 (Ips) は、PAECs4,5に transdifferentiated をすることができます。この手法患者固有の PAECs の豊富な文化ほか、PAEC 生物に及ぼす患者固有の遺伝的背景の研究をできます。これらの利点にもかかわらず、これらの IPSC 由来の PAECs はローカル微小環境と患者固有の遺伝的背景との間の相互作用についての情報を提供できません。当社グループは、「カテーテル先端」と IPSC テクニック フィールド8を進める上での相乗効果があるビューを発表しています。
この現状と歴史のコンテキスト内でこの技術の制限を注意してください。まず、このメソッドから派生した PAECs の利回りがかなり変わることに注意してくださいすることが重要です。おそらく、患者 – 病状態と医師固有の要因に貢献この変動プロトコルにソースの材料の主要な損失が期待される手順が含まれていません。表 1に示す代表 CD146 + さまざまなさまざまな異なる肺高血圧症の病態の患者から得られたカテーテル先端を利用した PAEC 収穫からさまざまな医師演算子が得られます。第二に、セル利回りが全面的に低いと文化の彼らの生存率が低くまだ我々 の手で証明されています。一方、我々 は以前、この方法1を使用して PAECs の文化を成長している、次のサンプルのほとんどのダイオフ前駆細胞のサブセットのそれらの結果を表す救助を想定し、断続的に我々 の手で成功しただけ。たとえば、めっきされた収穫後の朝文化の数十の付着のみ PAECs を検索することは珍しくありません。多くの場合これらのマイクロ文化は拡大に保持されません。さらに作業は、PAECs の生存を維持する方法でこのプロトコルと患者固有 PAEC 収穫の伝播の目的目標を達成するために文化の彼らの条件を最適化するために必要です。最後に、我々 が適応している CD146 の肯定的な選択は循環内皮細胞4血管、平滑筋細胞と珍しい CD146 + T 細胞9,10など、他の CD146 + 細胞の混入を除外できません。それにもかかわらず、これらの細胞は、この方法で収集されたサンプルの数は非常に少ないと推定される、CD146 はかなり (これは血液媒介性の様々 な存在も CD31 などの内皮細胞の他の細胞のマーカーよりもこのプロトコルの特定血小板11を含むセル) です。特異性の改善に向けた今後の改善は、収量への潜在的に否定的な影響に対するバランスする必要があります。
The authors have nothing to disclose.
著者は医師に感謝し、カテーテル サンプルの何百もを容易にした数年間を提供するためのアレゲニー総合病院の高度な心不全や肺高血圧症のサービス スタッフをサポートしたい、この手法の最適化。
100mm culture dish | Fisher | NC9385690 | |
15 mL Centrifuge Tubes | Midsci | C15R | |
16% Formaldehyde | Fisher | PI28908 | |
50 mL centrifuge tubes | Midsci | C50R | |
Accutase | Thermo | A1110501 | cell detachment solution |
Cell Scraper | Fisher | 08-100-241 | |
Endothelial Cell Growth media | Cell Applications | 211-500 | |
Forceps | any | ||
Hemostat | any | ||
LoBind microfuge tube | Fisher | 13-698-794 | |
Miltenyi CD146 beads | Miltenyi | 130-093-596 | |
Miltenyi FCR blocker | Miltenyi | 130-059-901 | |
Miltenyi LS columns | Miltenyi | 130-042-401 | |
Miltenyi magnet | Miltenyi | MidiMACS | |
Miltenyi RBC lysis buffer | Miltenyi | 130-094-183 | |
PBS | Fisher | BP2438-4 | |
Scissors | any | ||
Syringes | BD | 309597 |