يصف هذا البروتوكول بالإزالة وتنقية خلايا بطانية الشريان الرئوي (بايكس) التي تلتزم بنصائح بالون من سوان-غانز القسطرة في حين أنها هي مثبتة في الشريان الرئوي أثناء قسطرة القلب الصحيح وتبقى ملتصقة بالون المنكمشة بعد إزالة من جسم المريض.
مجموعة متنوعة من الأمراض التي تؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH)، الذي يعرف بأنه ضغط شريان الرئوي يعني تزيد عن 25 مم زئبق في بقية. لمزيد تشخيص وإدارة الأس الهيدروجيني، الخضوع مرضى القلب الحق المتكررة كاثيتيريزيشنز (يستبدل) حيث قسطرة سوان-غانز متقدمة في فرع من الشريان الرئوي وهو تضخم بالون آسفين نصيحة القسطرة. توضح هذه المقالة بروتوكول بموجبه خلايا بطانية الشريان الرئوي (باكس) قد يكون حصادها من تلميحات البالون من سوان-غانز القسطرة بعد يستبدل، وتنقية مع أسلوب عمود تقارب CD146 المضادة لتنقية باكس المفترضة. قد يتم استخدام هذه الخلايا لتوفير صورة في الموقع حالة البطانة الرئوية المفرج استكمالا للقياسات الفسيولوجية التي تم الحصول عليها خلال يستبدل البيولوجية. حصاد ويجوز استخدامها باكس المنقي للثقافة أما الخلية أو لفحوصات تحليلية اللاحقة مثل تدفق سيتوميتيري.
تتطلب المبادئ التوجيهية الحالية للولايات المتحدة وأوروبا قسطرة القلب الصحيح لتشخيص ارتفاع ضغط الدم الرئوي1. الأطباء والعلماء تسعى إلى فهم هذا المرض رغبة عينات بيولوجية من المفرج الرئوية لتكملة البيانات الفسيولوجية التي تم جمعها خلال يستبدل. ولسوء الحظ، المخاطر المرتبطة خزعة الأوعية الدموية الرئوية مرتفعة جداً، وذلك عينات بيولوجية من المفرج الرئوية ونادراً ما إذا تم الحصول عليها من أي وقت مضى من معيشة المرضى الذين يخضعون للرعاية. في حين قد تم اكتساب قدر كبير من التبصر من نسيج وعائي رئوي الحصول عليها من المأخوذة أو اكسبلانتيد الرئتين، هذه العينات غير قادرين على تعكس بيولوجيا عملية المرض PH كما أنها تتكشف في مريض معيشية. في عام 2013، ونحن أولاً أفادت أن خلايا بطانية الشريان الرئوي (بايكس) يتم تجريد من فروع الشريان الرئوي بالاتصال المادي مع تلميح بالون قسطرة سوان-غانز خلال يستبدل، ويمكن استردادها بإعداد صغيرة من نصائح قسطرة بعد الإجراء2.
يوضح هذا المقال لدينا أسلوب لإزالة وتطهير خلايا بطانية الشريان الرئوي (باكس) من تلميحات البالون من سوان-غانز القسطرة بعد قسطرة القلب الصحيح. حتى الآن، قد وصفت منهجية لأداء هذا الأسلوب الحصاد في تفاصيل كافية في الأدب لضمان تحقيق نتائج موحدة بين المختبرات أداء التقنية. تم إعداد هذه المقالة للتغلب على هذا القصور، تقدم التظاهرة تصور تقنية، من جمع نصائح قسطرة للمنتج النهائي لتنقية خلايا CD146 + بطانية السرير. هذا الأسلوب يجب أن تساعد في النهوض بالبحوث في بل مسببات مختلفة لدرجة الحموضة، وربما يؤدي إلى تطوير فحوصات تشخيصية جديدة لتكملة البيانات الفسيولوجية التي جمعت خلال يستبدل.
أهمية هذا الأسلوب في ميدان طب الأوعية الدموية الرئوية والبحوث هو أنه يوفر الوصول إلى لقطة لبيولوجيا البطانة الرئوية في الموقع، وعلى النقيض من الدراسات السابقة على اكسبلانتيد أو المأخوذة من الرئتين، ولا تمثل نقطة نهاية للرئة في هذا الموضوع. في الآونة الأخيرة، ونحن تبين أن العلامات البيولوجية المضادة-أبوبتوتيك في هذه الخلايا قد يكون فائدة في أدق phenotyping المتعلقة بأنواع مختلفة من ارتفاع ضغط الدم الرئوي3. عائد الخلايا التي تم الحصول عليها صغيرة نسبيا، ~ 5، 000-25,000 باكس كل عينة، وهذه الخلايا صعبة (ولكن ليس من المستحيل) للثقافة. ونحن نعتقد أن ذكي الأطباء والباحثين ستجد التآزر بين هذه التقنيات رفيق بغية النهوض بالبحوث والأوعية الدموية الرئوية والتشخيص وبروجنوستيكس.
الأسلوب الموصوفة في هذه المقالة هي تقدير أفضل في سياق السابقة نماذج تجريبية لدراسة في بطانة الأوعية الدموية الرئوية. محاولات سابقة للحصول على باكس من البشر كانت محدودة إلى الرئتين اكسبلانتيد/المأخوذة5 ومحاولة لم تدم طويلاً لوضع قسطرة قادرة على الشريان الرئوي خزعة6. كما لوحظ في مراجعة الأخيرة7، يتميز هذا الأسلوب من الحصاد أنسجة الرئة بقدرته على الحصول على باكس من حياة الإنسان، والقيام بذلك في نقاط زمنية متعددة في التطور المرض و/أو العلاج. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن أسلوب رفيق مؤخرا أبلغ بموجبه الناجمين عن الخلايا الجذعية pluripotent (إيبسكس) يمكن أن تكون ترانسديفيرينتياتيد في باكس4،5. هذا الأسلوب ينتج ثقافات وفيرة من باكس الخاصة بالمريض ويسمح لدراسة آثار الخلفية الوراثية الخاصة بالمريض على علم الأحياء الباكستانية. وعلى الرغم من هذه المزايا، لا توفر هذه باكس المستمدة من اللجنة التوجيهية أي معلومات حول التفاعل بين المكروية المحلية والخلفية الوراثية الخاصة بالمريض. وقد قدمت مجموعتنا الرأي القائل بأن “نصيحة القسطرة” وتقنيات [ايبسك] يحتمل أن يكون التآزر في النهوض بالميدان8.
ضمن هذا السياق الحالية والتاريخية، ينبغي أن يلاحظ أوجه القصور في هذا الأسلوب. أولاً، من المهم أن نلاحظ أن غلات باكس المستمدة من هذا الأسلوب يمكن أن تختلف إلى حد كبير. ومن المفترض أن المريض، العوامل المحددة للدولة وطبيب الأمراض المساهمة في هذا التغير، كما البروتوكول لا يتضمن الخطوات التي يتوقع أن يتسبب في خسائر فادحة لمصدر المواد. ويبين الجدول 1 الممثل CD146 + غلة من طائفة متنوعة من المحاصيل الباكستانية الاستفادة من نصائح القسطرة التي تم الحصول عليها من مجموعة متنوعة من المرضى الذين يعانون من مرض مختلف الدول من ارتفاع ضغط الدم الرئوي ومجموعة متنوعة من مشغلي الطبيب. ثانيا، غلة الخلية منخفضة عموما، وقد ثبت صلاحيتها للثقافة أن أقل حتى الآن في أيدينا. بينما نحن نمت سابقا ثقافات باكس باستخدام هذا الأسلوب1، علينا تحمل تلك النتائج تمثل الإنقاذ لمجموعة فرعية خلايا السلف عقب يموت قبالة معظم العينة وناجحا إلا بشكل متقطع في أيدينا. على سبيل المثال، ليس من النادر أن تجد إلا تمسكا عشرات قليلة باكس في الثقافة صباح اليوم بعد قد تم مطلي حصاد. غالباً ما هذه الثقافات الصغرى لا البقاء على قيد الحياة للتوسع. يلزم المزيد من العمل لتحسين هذا البروتوكول بطريقة أنه سيتم الحفاظ على استمرارية باكس وأحوالهم في الثقافة لتحقيق الهدف المنشود لإكثار المحاصيل الباكستانية الخاصة بالمريض. أخيرا، لا يمكن استبعاد التحديد الإيجابي CD146 نحن تكيفت التلوث مع غيرها CD146 + الخلايا، مثل تعميم خلايا بطانية4، بيريسيتيس، وخلايا العضلات الملساء ونادر CD146 + “تي” الخلايا9،10. ومع ذلك، هذه الخلايا يفترض أن تكون قليلة جداً في عدد العينات التي يتم جمعها بهذه الطريقة، و CD146 إلى حد كبير أكثر تحديداً لهذا البروتوكول من علامات خلية أخرى من خلايا بطانية مثل CD31 (والذي أيضا على مجموعة متنوعة من المنقولة بالدم الخلايا بما فيها الصفائح الدموية11). ينبغي أن يكون متوازنا أي التحسينات المستقبلية التي تهدف إلى تحسين نوعية ضد آثارها السلبية المحتملة على الغلة.
The authors have nothing to disclose.
يود المؤلفون أن أشكر الأطباء ودعم موظفي دائرة متقدمة قصور القلب وارتفاع ضغط الدم الرئوي من المستشفى العام في الغني لتوفير مئات عينات قسطرة على مدى عدة سنوات التي سهلت الأمثل لهذه المنهجية.
100mm culture dish | Fisher | NC9385690 | |
15 mL Centrifuge Tubes | Midsci | C15R | |
16% Formaldehyde | Fisher | PI28908 | |
50 mL centrifuge tubes | Midsci | C50R | |
Accutase | Thermo | A1110501 | cell detachment solution |
Cell Scraper | Fisher | 08-100-241 | |
Endothelial Cell Growth media | Cell Applications | 211-500 | |
Forceps | any | ||
Hemostat | any | ||
LoBind microfuge tube | Fisher | 13-698-794 | |
Miltenyi CD146 beads | Miltenyi | 130-093-596 | |
Miltenyi FCR blocker | Miltenyi | 130-059-901 | |
Miltenyi LS columns | Miltenyi | 130-042-401 | |
Miltenyi magnet | Miltenyi | MidiMACS | |
Miltenyi RBC lysis buffer | Miltenyi | 130-094-183 | |
PBS | Fisher | BP2438-4 | |
Scissors | any | ||
Syringes | BD | 309597 |