Özet

בנייה של מערכי Microdrive להקלטות עצביות כרוניות בעכברים מתנהגים ערים

Published: July 05, 2013
doi:

Özet

התכנון וההרכבה של microdrives בקלטות אלקטרו vivo של אותות מוח של העכבר מתואר. על ידי הצמדת צרורות microelectrode לספקי driveable חסונים, טכניקות אלה יאפשרו להקלטות עצביות ארוכת טווח ויציבים. העיצוב קל משקל מאפשר ביצועי התנהגות בלתי מוגבל על ידי השתלת הדיסק הבאה של בעלי החיים.

Abstract

קלטות אלקטרו מדינה-of-the-art ממוחותיהם של בעלי חיים המתנהגים באופן חופשי תאפשר לחוקרים לבחון בו זמנית פוטנציאל בתחום מקומי (LFPs) מאוכלוסיות של תאי עצב ואת פוטנציאל פעולה מתאי בודדים, כמו בעלי החיים עוסק במשימות בניסוי רלוונטיות. microdrives המושתל כרוני לאפשר להקלטות במוח שעבר מעל לתקופות של מספר שבועות. כוננים זעירים ורכיבים קלים לאפשר להקלטות ארוכות טווח אלה להתרחש ביונקים קטנים, כגון עכברים. באמצעות tetrodes, שמורכב מצרורות קלועות הדוק של ארבע אלקטרודות שבו יש לכל חוט בקוטר של 12.5 מיקרומטר, אפשר לבודד תאי עצב פעיל מבחינה פיזיולוגית באזורים השטחיים של מוח, כגון קליפת מוח, בהיפוקמפוס הגבי, וsubiculum, כמו גם כאזורים עמוקים יותר כגון הסטריאטום ובאמיגדלה. יתר על כן, בטכניקה זו מבטחת הקלטות עצביות יציבות, באיכות גבוהה כמו בעלי החיים הוא אתגר עם varieטיי של משימות התנהגותיות. כתב יד זה מתאר כמה שיטות שמוטבו כדי להקליט ממוח העכבר. ראשית, אנו מראים כיצד לפברק tetrodes, לטעון אותם לתוך צינורות driveable, וזהב, צלחת העצות שלהם על מנת להפחית את העכבה שלהם מMΩ לטווח KΩ. שנית, אנו מראים כיצד לבנות הרכבה Microdrive מותאמת אישית לביצוע והעברת tetrodes אנכי, עם השימוש בחומרים זולים. שלישית, אנו מציגים את השלבים להרכבת Microdrive זמין מסחרי (Neuralynx VersaDrive) שנועד לשאת tetrodes באופן עצמאי מטלטלין. לבסוף, אנו מציגים תוצאות מייצגות של פוטנציאל בתחום מקומי ואותות המתקבלים יחידה אחת בsubiculum הגב של עכברים. יכולות להיות שונה בטכניקות אלה בקלות כדי להתאים לסוגים שונים של מערכי אלקטרודה וערכות הקלטה במוח העכבר.

Introduction

השימוש בטכניקת microelectrode להקלטת אותות עצביים תאיים in vivo יש מסורת ארוכת שנים ומוערכת במדעי המוח 1, 2. היכולת להקליט פעילות חשמלית מאזורים רבים במוח בבעלי חיים מתנהגים באופן חופשי, עם זאת, טכנולוגיה חדשה יותר שהופכת נפוצה יותר ויותר כחבילות התוכנה לרכישה, הניתוח והאפליה של אותות עצביים הופכת להיות יותר מתוחכם וידידותי למשתמש 3, 4. ההתקדמות הטכנולוגית בצד התוכנה יש גם מלווה בירידה במשקל וחלק הארי של מכשירים להשתלה, שקוצץ במידה מספקת להקלטה ביונקים קטנים, כגון עכברים. על ידי שימוש בפלסטיק (בעיקר) מרכיבים קלים, חוקרים מסוגלים לבנות microdrives המאפשרים למיצוב עצמאי של אלקטרודות או tetrodes למקד מגוון רחב של אזורים במוח 5-7. מבנים מוחיים אפילו עמוקים, כגוןהאמיגדלה 6 וסטריאטום 5, יכולות להיות ממוקד באופן שגרתי עם מבחר של בורג נסיעה ארוך כראוי. טכניקות הקלטה אלו מאפשרים לחוקרים לקבל אותות עצביים באיכות גבוהה ונמצאות בלהירשם עם את הפעילות החשמלית של תאי עצב בודדים נרשמו intracellularly 8, 9. שימוש בסוגי microdrives אלה, יש לנו נרשמו הצלחה יחידה יחידות מעכברים לתקופה של עד חודשים לאחר השתלת 10. בנוסף, הטבע קל של המכשירים (כ 1.5-2.0 גר ') הביא לביצועי התנהגות שדומה לעכברים שאינם מושתלים במשימות התנהגותיות רבות. בפרט, יש לנו הראו כי עכברים מושתלים להציג ביצועים נורמלי במשימת זיהוי אובייקט רומן 10 והמשימה מקום האובייקט (נתונים שלא פורסמו).

השימוש בmicrodrives מצמידים tetrodes מרובים מאפשר לחוקרים לעקוב ולנתח פעילות עצבית ברמת הרשתגם בעת הקלטה מ-יחידות בודדות מרובות בתוך המוח. יש הקלטה עם tetrodes אלה יש מספר יתרונות עיקריים למטרות זיהוי יחידה ומאפשרת רכישת הדיוק הגבוהה ואפליה של יחיד יחידות מרובות 11. אנו מתארים כיצד לפברק וחבילות tetrode זהב צלחת ואז לאחר מכן לטעון אותם לתוך ספקי אלקטרודה driveable. סוג אחד של מנשא כונן שאנו מתארים הוא זמין באופן מסחרי, והשני הוא עיצוב פשוט, אבל להרחבה בקלות, כונן שיכול להכיל מספר רב של ספקים והסדרי tetrode ללא השקעה משמעותית של משאבים.

Protocol

1. Tetrode ייצור התחל על ידי שימוש 12.5 מיקרומטר מבודד (0.0005 ") תיל הפלטינה אירידיום ליבת קוטר מתיל דק קליפורניה. אורך החוט יש לחתוך לאורך המתאים למבנה היעד. לדוגמה, לחתוך את החוט לאורך של לפחות 30 ס"מ למיקוד subiculum הגבי או הי…

Representative Results

<p class="jove_content"> לאחר השתלת Microdrive והוריד את האלקטרודות למטרות המיועדות במוח, במערכת רכישת נתונים מוגברת, כגון צורך Neuralynx Lynx-8, להקלטת אותות עצביים. הקלטות נציג עצביות של פוטנציאל בתחום המקומי (LFPs) ופוטנציאל פעולת יחידה אחת ("קוצים" שמכונים לעתים קרובות) מsubiculum הגבי מוצגות בעכבר<strong> איור 2</strong>. אות?…

Discussion

יש לנו תאר קבוצה של טכניקות לבניית microdrives קל וקומפקטי להקלטה של ​​יחידה ופעילות תאית פוטנציאל שדה בעכברים. על ידי בניית microdrives מותאם אישית עם בסיסים עצבו מזכוכית אקרילית (מתיל), ניתן להתאים את מערכת הליבה בקלות למספר כוננים ולמיקוד של מגוון רחב של אזורים עצביים. יש לנ…

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

אנו מודים דניאל קארפי לעזרה והתרומות מוקדמות לפרויקט הזה שלו. אנו מודים גם לוקרסיה Novoa על סיועה ביצירות אמנות ותמונות. עבודה זו נתמכה על ידי NIH / NIAID תכנית מענק 5P01AI073693-03.

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalog Number Yorumlar
0.0005″ (12.5 μM) diameter Platinum-Iridium wire California Fine Wire CFW#100-167 HML VG insulated www.calfinewire.com
0.002″ (50 μM) diameter Stableohm 675 wire California Fine Wire CFW# 100-188 HML insulated Ni-Cr
polyamide tubing Polymicro Technologies 1068150020 99 micron I.D., 166 micron O.D. www.polymicro.com
brass guides World Plastics Inc 3.3 x 6.6 mm
Delrin blocks World Plastics Inc 3.13 x 2.5 mm
Fillister head brass screws J.I. Morris Co. 00-90 x 1/2 drive screw www.jimorrisco.com
hex brass nuts J.I. Morris Co. 00-90
Fillister head brass screws J.I. Morris Co. 000-120 x 3/32 EIB mount and ground screw
plexiglass acrylic Canal Street Plastics 5 mm thick, clear, www.cpcnyc.com
cyanoacrylate Krazy Glue 2 g tube
electronic interface board Neuralynx EIB-18 www.neuralynx.com
non-cyanide gold solution SIFCO SIFCO 5355 www.sifcoasc.com
VersaDrive 4 Neuralynx four tetrode model
tetrode assembly station Neuralynx
motorized tetrode spinner Neuralynx tetrode spinner 2.0
VersaDrive jig Neuralynx
soldering iron Radio Shack 64-2802B www.radioshack.com
nanoZ Neuralynx
small bit drill/driver Ram Products Rampower 35 with footpedal controller, www.ramprodinc.com
drill bits Small Parts, Inc. 3/32″ bits, www.smallpartsinc.com
dissecting microscope Olympus SZ-60 www.olympusamerica.com
heat gun Alphawire Fit gun 3 use setting “1” only, www.alphawire.com
26 AWG copper wire Arcor Electronics F26 for ground wires, www.arcorelectronics.com
soldering flux Eagle 2 oz, #205
0.02″ diameter solder Kester 24-6337-0010 www.kester.com
benchtop vise Vacu-Vise Model 300
fiber optic light Nikon MKII dual light arms, www.nikon.com
5-min epoxy Allied Electronics 25 ml, www.alliedelec.com
fine tweezers Roboz Surgical Instrument Co. RS-4907, RS-5010 INOX material, www.roboz.com
micro dissecting scissors Roboz Surgical Instrument Co. RS-5880

Table 1. Materials and reagents used for constructing tetrodes and microdrives.

Referanslar

  1. Recce, M. L., O’Keefe, J. The tetrode: a new technique for multi-unit extracellular recording. Soc. Neurosci. Abstr. 15, 1250 (1989).
  2. O’Keefe, J., Recce, M. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus. 3, 317-330 (1993).
  3. Chen, G., Wang, L. P., Tsien, J. Z. Neural population-level memory traces in the mouse hippocampus. PLoS ONE. 4 (12), e8256 (2009).
  4. Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. The origin of extracellular fields and currents — EEG, ECoG, LFP, and spikes. Nat. Rev. Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).
  5. Tort, A. B., Kramer, M. A., et al. Dynamic cross-frequency coupling of local field potential oscillations in rat striatum and hippocampus during performance of a T-maze task. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 105 (51), 20517-20522 (2008).
  6. Seidenbecher, T., Laxmi, R., et al. Amygdalar and hippocampal theta rhythm synchronization during fear memory retrieval. Science. 301 (5634), 846-850 (2003).
  7. Yamamoto, J., Wilson, M. A. Large-scale chronically implantable precision motorized microdrive array for freely behaving animals. J. Neurophysiol. 100 (4), 2430-2440 (2008).
  8. Harris, K. D., Henze, D. A., et al. Accuracy of tetrode spike separation as determined by simultaneous intracellular and extracellular measurements. J. Neurophysiol. 84 (1), 401-414 (2000).
  9. Henze, D. A., Borhegyi, Z., et al. Intracellular features predicted by extracellular recordings in the hippocampus in vivo. J. Neurophysiol. 84 (1), 390-400 (2000).
  10. Chang, E. H., Huerta, P. T. Neurophysiological correlates of object recognition in the dorsal subiculum. Front. Behav. Neurosci. 6, 46 (2012).
  11. Gray, C. M., Maldonado, P. E., et al. Tetrodes markedly improve the reliability and yield of multiple single-unit isolation from multi-unit recordings in cat striate cortex. J. Neurosci. Methods. 63 (1-2), 43-54 (1995).
  12. O’Keefe, J., Dostrovsky, J. The hippocampus as a spatial map. Preliminary evidence from unit activity in the freely-moving rat. Brain Res. 34 (1), 171-175 (1971).
  13. Wilson, M. A., McNaughton, B. L. Dynamics of the hippocampal ensemble code for space. Science. 261 (5124), 1055-1058 (1993).
  14. Buzsáki, G. . Rhythms of the Brain. , (2006).
  15. McHugh, T. J., Blum, K. I., et al. Impaired hippocampal representation of space in CA1-specific NMDAR1 knockout mice. Cell. 87 (7), 1339-1349 (1996).
  16. Resnik, E., McFarland, J. M., et al. The effects of GluA1 deletion on the hippocampal population code for position. J. Neurosci. 32 (26), 8952-8968 (2012).
  17. Cacucci, F., Yi, M., et al. Place cell firing correlates with memory deficits and amyloid plaque burden in Tg2576 Alzheimer mouse model. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (22), 7863-7868 (2008).
  18. Sigurdsson, T., Stark, K. L., et al. Impaired hippocampal-prefrontal synchrony in a genetic mouse model of schizophrenia. Nature. 464 (7289), 763-767 (2010).
  19. Engel, A. K., Moll, C. K., et al. Invasive recordings from the human brain: clinical insights and beyond. Nat. Rev. Neurosci. 6 (1), 35-47 (2005).
  20. Cash, S. S., Halgren, E., et al. The human K-complex represents an isolated cortical down-state. Science. 324 (5930), 1084-1087 (2009).

Play Video

Bu Makaleden Alıntı Yapın
Chang, E. H., Frattini, S. A., Robbiati, S., Huerta, P. T. Construction of Microdrive Arrays for Chronic Neural Recordings in Awake Behaving Mice. J. Vis. Exp. (77), e50470, doi:10.3791/50470 (2013).

View Video