재현을 만드는 새로운 기술<em> 생체 내</em마우스 자궁 경부 척수 열상 부상> 모델이 설명되어 있습니다. 이 기술은 ± 0.01 mm의 정확도로 전류를 고주파 블레이드를 사용하여 척수의 경부 측면과 열상의 고정으로 척추 안정화를 기반으로합니다.
유전자 변형 생쥐의 사용은 척수 손상 (SCI) 등 여러 신경 질환을 기본 분자 메커니즘에 대한 우리의 이해를 향상시킵니다. SCI의 열상 모델을 생산하는 데 사용되는 자유형 수동 제어는 종종 호감이나 타박상 구성 요소, 따라서 새로운 기술이 개발과 관련된 일관성 부상을 만듭니다. 자궁 경부 열상 SCI 우리의 모델) 척추면 고정, 2에 의해) 강화 된 척수 노출 자궁 경부 척추 안정화를 1 통합하여 자유 방법으로 고유의 어려움을 해결하고 있으며, 3) 척수의 재생 열상의 생성은 진동 블레이드를 사용하여 관련된 타박상없는 깊이 ± 0.01 mm의 정확도. 이러한 메스 나 가위 손 사용과 같은 SCI 열상을 만드는 표준 방법에 비해, 우리의 방법은 일관된 병변을 생산하고있다. 이 방법은 corticosp의 축삭 재생에 대한 연구에 유용원고 판, rubrospinal, 그리고 지느러미 오름차순 책자.
유전자 변형 생쥐의 여부는 SCI의 메커니즘의 역할을 특정 유전자의 영향을 식별 할 수있는 강력한 도구입니다. 열상 SCI이 부상 8 다음과 효과적인 치료를 제공 할 수 있습니다 치료제 또는 분자를 검사하는 데 사용되는 중요한 모델입니다. 생쥐의 열상 부상의 작성 중에 극돌기 프로세스의 정착으로 인해 척추 고정하기 5-11 유지 보수와 관련된 얇고 깨지기 쉬운 가시가 프로세스를 파악에 어려움 부정확 할 수 있습니다. 0.2 mm (마우스 척수의 직경의 10 %)의 열상의 깊이의 변화는 데이터의 잘못된 해석됩니다. 척수 열상 병변의 성격과 범위는 정확하게 10 정의해야합니다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 척추 안정화로 구성된 새로운 기술을 개발하고 루이스 상해 시스템 장치에 연결 제조 블레이드를 사용했습니다 (LISA)의 열상 SCI 7,14를 생산. 이 부상은 열상 과정에서 조직의 변형을 피할 날카로운 진동 블레이드를 사용하여 만들어졌습니다. 열상의 깊이는 열상의 깊이를 제어하는 마이크로 드라이버를 사용하여 0.01 mm의 정확도로 정확하게이었다. 절단 블레이드 원하는 열상에게 등고선 9를 만들려면 특정 모양과 폭에 주문품 있습니다. 우리는 1) 경추 노출, 2의 방법) 양측면 고정 장치를 사용하여 척추 안정화 기술, 및 진동 블레이드를 사용하여 자궁 경부 열상 부상 3)의 생성을 보여줍니다.
척수 열상 부상 이전에 척추 안정화 극돌기 프로세스의 고정에 의해 획득되었다. 마우스 T1을 통해 C3에서 부서지기 쉬운 짧은 자궁 경부 추간판 프로세스 클램프의 경추 전만 곡선과 첨부 파일 모두 효과적인 척추 안정화를 방지합니다. 또한, 수동 제어 병변 6의 깊이에 변화를 만드는 중요한 조직의 변형을 일으키는 원인에 따라 활용 면도날이나 microscissors의 사용. 이 특정 경로의 축삭 재생을 연구, 특히 데이터의 오해로 이어질 수 있습니다. 지느러미 피질 기관이 완전히 lesioning시 그었되지 않은 경우 예를 들어, 절약 등의 피질 축삭이 재생 축삭으로 해석 될 수있다. 이러한 문제는 단일 레벨과 척수의 정확한 lesioning의 측면에 고정으로 척추 안정화 장치를 사용하여 극복 할 수 있습니다. 또한, 아를 사용하여고등학교의 주파수 진동 블레이드 인접한 척수를 분쇄하거나 contusing없이 선명한 열상을 생산하고 있습니다. 이 방법은 마우스 6 흉부 척수 열상을 생산 이후의 변경으로, 쥐 9,12,14에서 척수 열상 부상을 생산하는 데 사용되었습니다. 현재의 통신에서, 우리는 마우스 신뢰할 수있는 자궁 경부 열상 병변을 만드는 방법을 설명합니다.
척수의 전후 직경이 마우스 <2mm입니다 경우에 한해, 열상 병변의 정확한 깊이는 신뢰할 수있는 실험 모델을 만드는 데 중요합니다. 병변의 깊이 최소한의 변화가 크게 축삭의 재생뿐만 아니라 부피 및 행동 연구를 평가하는 실험의 결과를 변경합니다. 우리는 절단 날의 위치를 제어하는 높은 정밀도 마이크로 드라이버를 사용하기 때문에이 방법을 사용하여 병변 깊이의 정확도는 ± 0.01 mm입니다. 이 방법의 불일치를 감소시켰다열상 SCI를 만드는 다른 모델 herent. 이 방법은 피질 기관, rubrospinal 기관, 그리고 지느러미 오름차순 기관으로 척수의 등쪽 반에있는 긴 척수 경로의 축삭 재생을 공부에 특히 유용합니다. 이 방법으로,이 섬유 책자 완전히이고 안정적으로 그었 수 있습니다. 이러한 관점에서, 데이터 해석의 오류가함으로써 SCI에 대한 실험 연구의보고의 신뢰성을 향상 최소화됩니다.
요약하면, 우리는 마우스 자궁 경부 척수 열상 손상의 생체 모델의 재현을 만드는 새로운 기술을 설명했습니다. 이 기술은 진동 블레이드를 사용하여 척수의 경부 측면과 열상의 고정으로 척추 안정화를 기반으로합니다. 마우스 6 등의 흉부 척수 열상 모델에서이 방법을 사용하여, 우리는 열상 깊이, 조직학 및 간 긴밀한 상관 관계를 보여행동 복구 할 수 있습니다. 이러한 기술은 다른 여러 실험실 2,12으로 신뢰할 수 발견되었습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 장치의 개발은 LISA (주), 루이스 빌, 켄터키에 의해 지원되었다. 우리는 또한 노턴 의료, 루이스 빌, CBS에 KY, 그리고 NIH NS050243, NS052290 및 XMX에 NS059622의 지속적인 지원을 인정합니다.
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Yorumlar |
Mice vertebral stabilizer | Louisville Impactor System | Stabilize and expose the cervical vertebra | |
LISA vibraknife | Louisville Impactor System | Produce the laceration injury of the cervical spinal cord | |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15013-12 | Skin and trapezius muscle incision |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15023-10 | Separate muscles from the laminae |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15002-08 | Incision of dura |
Graefe forceps | Fine Science Tools (USA) | 11154-10 | Retract skin |
Dumont #7 forceps | Fine Science Tools (USA) | 11274-20 | Muscle retraction (tip modified)(Fig. A) |
Dumont SS forceps | Fine Science Tools (USA) | 11203-25 | Fixation of vertebra (tip modified )(Fig.B) |
30G needle | Becton Dickenson | 305106 | Create a dural opening |
6-0 suture | Ethicon | 8806H | Close muscle and fascial layers |
wound clip | Fine Science Tools (USA) | 12031-07 | Skin closure |
Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | 90710-10G | Anesthetic agent |
Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail: cbshields1@gmail.com Fine Science Tools (USA), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail: info@finescience.com Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, USA, 63178 (314) 771-5765, E-mail: cssorders@sial.com |
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Figure A is the modified Dumont #7 forceps; B is the modified Dumont SS forceps. |