دالة فاصل الدهنية (FSL) يبني يسمح تعديل خصائص سطح الخلايا الحية وvirions دون فقدان للحيوية. الأسلوب يتطلب اتصال بسيط فقط من التوصل إلى حل بناء FSL مع خلية / الفيريون وعفوية ومستقرة التأسيس سطح يحدث.
القدرة على تعديل / تصور السطوح البيولوجية ، ومن ثم دراسة الخلية المحورة / الفيريون في طائفة من في المختبر والمجراة في بيئات ضروري لكسب مزيد من التبصر في وظيفة معينة أو جزيئات الكيان برمته. وتقتصر عموما دراسات بيولوجية لتعديل السطح الهندسة الوراثية للكائن أو مرفق من الأنصاف التساهمية الكيميائية لسطح الخلية 1،2. لكن هذه التقنيات التقليدية لكشف الخلية المتفاعلات الكيميائية ، أو أنها تتطلب معالجة كبيرة لتحقيق النتائج المرجوة ، مما يجعلها مرهقة ، وأنها قد تؤثر أيضا على البقاء دون قصد / ظائف الخلية المحورة. مطلوب طريقة بسيطة لتعديل دون ان تسبب أذى على سطح الخلايا.
في الآونة الأخيرة تقنية جديدة ، فقد طرحت كودي تكنولوجيا مجموعة من يبني رواية تتألف من ثلاثة عناصر : رئيس مجموعة وظيفية (F) ، هل A (S) وذيل المادة الدهنية (L) ويعرف وظيفة ، أو الدهن ، فاصل FSL constructs3. هل تم تحديد (S) لتوفير بناء هذا هو التشتت في الماء ، ولكن سيكون عفويا وستابلي تدرج في غشاء.
FSL بناء الأنصاف وظيفية (F) حتى الآن وتشمل مجموعة واسعة من ساتشاريديس الدم بما في ذلك المحددات المتعلقة المجموعة ، والأحماض السياليك ، السكريات hyaluronan ، fluorophores ، البيوتين ، radiolabels ، ومجموعة من الببتيدات 12/03. وقد استخدمت يبني FSL تعديل في الأجنة ، الحيوانات المنوية ، الزرد ، والخلايا الظهارية / بطانة الرحم ، وخلايا الدم الحمراء ، وvirions لإنشاء نظم مراقبة الجودة والألواح التشخيص ، لتعديل خلية التصاق / تفاعل / الانفصال / الشلل ، وعليها في المختبر وفي التصوير من الخلايا الحية / virions 12/03.
عملية تعديل الخلايا / virions هي عامة وبسيطة للغاية. الإجراء الأكثر شيوعا هو احتضان خلايا (في وسائل الإعلام الحرة الدهن) حلا لFSL يبني لمدة 1-2 ساعات في 37 درجة مئوية 40-10. أثناء الحضانة وFSL يبني تلقائيا تدرج في الغشاء ، واكتمال العملية. غسل اختيارية. وتعرف الخلايا المعدلة ويبني FSL kodecytes 6-9 ، في حين يتم virions kodevirions 10.
FSL يبني كما استخدمت الحقن المباشر وkodecytes / kodevirions في النماذج الحيوانية التجريبية 7،8،10. جميع kodecytes / kodevirions يبدو أن تحتفظ حيويتها الطبيعية وظيفة في حين كسب وظيفة جديدة من طراز F 7،8،10،11 شاردة.
مزيج من تشتت حيويا في وسائل الإعلام ، إلى إدماج عفوية أغشية الخلايا ، وسمية منخفضة واضح ، يجعل FSL يبني أدوات بحثية قيمة لدراسة الخلايا وvirions.
تعديل وخلايا virions مع ثوابت FSL هي تقنية بسيطة جدا وقوية 11/03. لوصف وتمييز FSL بناء خلايا معدلة وغير معدلة virions من الخلايا ، التي تسمى kodecytes وkodevirions 60-10 على التوالي ، ولكن فقط عندما يمكن أن تظهر في مجموعة وظيفية وعرض لتكون موجودة على الغشاء بهم. عندما تتم kodecytes مع تركيزات مختلفة من يبني FSL ، يمكن الإشارة إليها من قبل تركيز المحلول بناء FSL تستخدم لخلق لهم ، على سبيل المثال 15 ميكروغرام / مل وkodecytes ، أو إذا تم استخدام أكثر من واحد لمدة FSL ثم مجتمعة ، مثال : + 7،8 kodecytes البيوتين. عندما خلايا مختلفة وينبغي مقارنة ، بما في ذلك نوع من الخلايا في الوصف ويوصى ، على سبيل المثال البيوتين الخلية الحمراء أو kodecytes kodecytes البيوتين 7،8 بطانة الرحم.
وعلى الرغم من أن عملية الإدراج قوية جدا والإدراج (وإن كان ذلك بمعدلات مختلفة) تحدث على نطاق واسع درجة حرارة 4-37 درجة مئوية ، وخلال دقائق إلى ساعات ، للحصول على استنساخه الإدراج التحكم الصارم للوقت الاتصال ، ودرجة الحرارة ، وتركيز FSL ( مطلوبة بما في ذلك صياغة مخفف) وإلى حد أقل تركيز الخلية. حتى الآن ، ويمكن استخدام كافة بنيات FSL لتعديل الخلايا عن طريق نفس الأسلوب 11/04 ، ومع ذلك فمن المتوقع أن ظروف معينة ستكون اكثر ملائمة لتدفق العمل و / أو متطلبات التعامل الأمثل للخلايا / virions إلى تعديل . تركيز FSL الدقيق لتحقيق التأثير المطلوب يحتاج إلى يحدده المستخدم 4. وبناء الخلايا الناتجة FSL تعديل / virions يمكن عادة أن تستخدم بالطريقة نفسها باعتبارها الخلية معدلة / الفيريون في النظم البيولوجية أو تحليلية 4-11. كما سوف يبني FSL أزل ببطء من السطوح عند تعديل على اتصال مع حلول الدهون 7،8 ، أو يتم امتصاصها من قبل خلايا نشطة 11 ، لا بد من النظر في هذه المسائل فيما يتعلق بمستوى النشاط إشارة أو الحصول عليها على مدى فترات من الزمن. يمكن ان تكون ثابتة Kodecytes (على سبيل المثال غلوتارالدهيد / الفورمالين) بعد الإدراج قدمت تثبيتي ، لا تحتوي على دهون ويبلغ حجمه المذيبات وجماعة وظيفية متوافق مع مثبت. يمكن تعديل الخلايا ثابتة بدلا من يبني مع FSL.
ويمكن بالإضافة إلى تعديل أسطح الخلية والفيريون أيضا أن يبني FSL غرست مباشرة إلى الدورة الدموية للحيوانات المختبر مما تسبب في تعديل الخلايا الحية المتداولة 7 و 12 لكبح الفيروسات ، والسموم ، و 12 و 7 الأضداد. يبني FLS قد استخدمت أيضا لتزيين الليبوزومات ويمكن طباعتها على أسطح الورق 13 ، حيث شل ، ويمكن استخدامها في فحوصات التشخيص.
وينبغي أن القدرة على تعديل الخلايا الحية بسهولة مع مجموعة متزايدة من يبني FSL يثبت أن تكون البحوث مفيدة وأداة للتنمية لدراسة البيولوجيا سطح الخلية.
The authors have nothing to disclose.
المؤلفان بالشكر دان باس من سيغما الدريخ لعرض الفيديو. ونحن نشكر أيضا دون فرع شيرني Evgenii ، Chesla سكوت ، Hadac اليزابيث ، هاريسون أماندا ، داميان هيثكوت ، أنيكا هولت ، لان تشينغ تشوان ، ماكينتوش سوزانا ، Komarraju Sarvani ، Korchagina ايلينا ، اوليفر كارولين مارتن اولسون ، ستيفن باركر ، Rodinov ايجور الكسندر Tuzikov ويليامز اليانور لنتائجها والمساهمة في التوليف ، وتصميم البنى FSL وتحديد النشاط البيولوجي.
Sigma product number | Sigma name | Construct (KODE Biotech name) |
F9307 | FSL-A(tri) | FSL-A(GALNa3[Fa2]GALb)-SA1-L1 |
F9557 | FSL-B(tri) | FSL-B(GALa3[Fa2]GALb)-SA1-L1 |
F9807 | FSL-GB3 | FSL-GB3(GALa4GALb4GLCb)-SA1-L1 |
F9682 | FSL-Lea(tri) | FSL-LEA(GALb3[Fa4]GLCNb)-SA1-L1 |
F9182 | FSL-biotin | FSL-CONJ(1Biotin)-SC2-L1 |
F9432 | FSL-Galili | FSL-GALILI(GALa3GALb4GLCNb)-SA1-L1 |
F1058 | FSL-Fluorescein | FSL-FLRO4(fluorescein)-SA2-L1 |