في نيوت ، العدسة يجدد دائما من قزحية الظهرية التي transdifferentiation من الخلايا الظهارية الصباغية القزحية (IPES). نحن هنا وصف الإجراء إلى الخلايا الثقافة نيوت الظهرية والبطنية IPE وترسيخها على نيوت للعين. وبعد ذلك درس زرع الخلايا والأنسجة التي sectioning المناعية.
السلمندر مثل نيوت وقنفذ البحر تمتلك القدرة على تجديد العديد من أجزاء جسمه مثل فقدان الاطراف ، والذيل مع النخاع الشوكي ، والعين والدماغ والقلب ، والفك 1. على وجه التحديد ، هي فريدة من نوعها لسمندل الماء لها القدرة على التجدد العدسة. بعد إزالة العدسة والخلايا IPE القزحية الظهرية transdifferentiate إلى خلايا العدسة وشكل في نهاية المطاف إلى عدسة جديدة في حوالي 2،3 شهر. أبدا عرض هذه الخاصية للتجديد من قبل خلايا قزحية البطني. ويمكن دراسة إمكانية تجديد خلايا القزحية من خلال جعل عمليات زرع للخلايا في المختبر IPE مثقف. للثقافة ، وعزله للمرة الأولى في ظهري وبطني خلايا قزحية العين من ومثقف على حدة لفترة زمنية من 2 أسابيع (الشكل 1). وهذه الخلايا reaggregated المثقف ومزروع الخلفي للعين نيوت. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن يحتفظ reaggregate الظهرية قدرتها تشكيل العدسة في حين أن إجمالي بطني لا تشكل العدسات ، وتلخص ، وبالتالي فإن العملية المجراة في (الشكل 2) 4،5. هذا النظام من تحديد إمكانية تجديد خلايا قزحية ظهري وبطني مفيد جدا في دراسة دور الجينات والبروتينات المشاركة في تجديد العدسة.
وقد أنشأ هذا البروتوكول an في نظام المختبر لدراسة آليات التجديد في عدسة سمندل الماء. منذ المجاميع (الظهرية أو البطنية اتبع بإخلاص في السلوك المجراة خلال تجديد هذه التقنية يمكن أن تخفف من الجهد الهائل المطلوب لtransgenesis في سمندل الماء ويمكن استخدامها لتحقيق مكاسب من وظيفة ، فضلا عن فقدان وظيفة 7،8،9 من التجارب ، كما ويمكن ، بسهولة المجاميع أو القزحيات ككل أن يعامل مع عوامل النمو ودراسة آثارها على النحو المبين في هذا البروتوكول ، على سبيل المثال تمت دراسة دور الممر BMP باستخدام هذه التقنية 6.
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة لمنح Ey10540 PAT.
Material Name | Tip | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Lugol’s solution | Sigma | L-6146 | ||
HEPES | Sigma | H-4034 | ||
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonic acid | Sigma | E-10521 | ||
Dispase | Gibco | 17105-041 | ||
Trypsin 1:250 | Gibco | 27250018 | ||
L-15 ( Leibovitz) | Sigma | L-4386 | ||
DNase 1 | Sigma | D5025-150KU | ||
Kanamycin Sulfate | Gibco | 100x, 15160 | ||
FBS | Sigma | F4135 | ||
Fungizone (amphotericin B solution) | Sigma | A2942 | ||
24 well collagen coated plate | BD biosciences | 354408 |