Esta comunicação apresenta dados sobre a precisão e reprodutibilidade dos BioSpec nano-espectrofotômetro UV-VIS para dsDNA e quantificação de proteínas. Mesmo com ultra-pequenos volumes (1 a 2 L), a reprodutibilidade é excelente, enquanto a função automática de limpeza melhora o rendimento e os resultados em transição mínima para resultados mais precisos.
Procedimentos de quantificação de ácidos nucleicos têm avançado significativamente nos últimos três décadas. Cada vez mais, os biólogos moleculares exigem análise de pequeno volume consistente de amostras de ácido nucléico para seus experimentos. O BioSpec-nano oferece uma solução potencial para os problemas do impreciso, não-reprodutibilidade de resultados, inerente aos métodos de quantificação atual DNA, via óptica especializada e um detector sensível PDA. O BioSpec-nano também tem a funcionalidade automatizada, que a montagem de medição, e limpeza são feitas pelo instrumento, eliminando assim a colocação tedioso, repetitivo, e inconsistente do elemento de fibra ótica e limpeza manual.
Neste estudo, os dados são apresentados na quantificação de DNA e proteínas, bem como sobre reprodutibilidade de medição e precisão. Contato automatizada da amostra e digitalização rápida permite a medição em três segundos, resultando em rendimento excelente. A análise dos dados é realizada utilizando os recursos built-in do software. A fórmula utilizada para o cálculo da concentração de DNA é:
Concentração da amostra = DF · (OD260 OD320-) · NACF (1)
Onde DF = factor de diluição de amostra e NACF = fator de concentração de ácido nucléico.
O fator de concentração de ácido nucléico é definida de acordo com o analito seleccionados 1.
Resultados concentração de proteína pode ser expressa como mg / mL ou como moles / L, inserindo e280 e valores de peso molecular, respectivamente. Quando os valores de resíduos de Tyr, Trp e cisteína (SS bond) são inseridos no guia e280Calc, os valores do coeficiente de extinção são calculados como e280 = 5500 x (resíduos Trp) + 1,490 x (resíduos de Tyr) + 125 x (cisteína SS bond) . O valor e280 é usado pelo software para cálculo de concentração.
Além de determinação da concentração de ácidos nucléicos e proteínas, o BioSpec-nano pode ser usado como um espectrofotômetro micro-volume ultra-para muitos outros analitos ou como um espectrofotômetro padrão usando 5 células caminho ótico mm.
O BioSpec-nano foi projetado para resolver problemas atuais inerentes métodos de quantificação de DNA, como resultados inconsistentes e trabalho manual tedioso. Cada medição leva apenas 3 segundos, permitindo que um biólogo molecular experiente para analisar cerca de 3-6 amostras múltiplas em um minuto. O recurso de limpeza única não só melhora o rendimento de medição, ele também elimina a necessidade de limpeza manual dos pedestais, resultando em extravasamento insignificante entre as medidas. Além disso, os testes usando apenas dois toalhetes para as amostras de DNA contendo 1.000 ng / mL, indicado transição menos de 2 ng / mL.
A disponibilidade de uma célula de caminho ótico 5 milímetros oferece uma opção para analisar ácidos nucléicos e diluir amostras de proteínas e estende o uso deste instrumento para outras aplicações.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tip | Company | Catalogue Number | Comment |
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BioSpec-nano | Shimadzu | |||
Calf Thymus DNA | Sigma Aldrich | |||
Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich |