Esta comunicación se presentan datos sobre la precisión y la reproducibilidad de los BioSpec nano-Espectrofotómetro UV-VIS de ADN de doble cadena y cuantificación de proteínas. Incluso con ultra-pequeños volúmenes (1 a 2 L), la reproducibilidad es excelente, mientras que la función de limpieza automática mejora el rendimiento y los resultados en un mínimo de arrastre para obtener resultados más precisos.
Nucleicos procedimientos de cuantificación de ácido han avanzado significativamente en las últimas tres décadas. Cada vez más, los biólogos moleculares requieren constante de volumen pequeño análisis de las muestras de ácidos nucleicos para sus experimentos. El BioSpec-nano ofrece una posible solución a los problemas de la inexacta, no reproducibles, inherentes a los actuales métodos de cuantificación de ADN, a través de ópticas especializadas y un detector PDA sensibles. El BioSpec-nano también tiene funcionalidades automatizadas de tal manera que el montaje, la medición, y la limpieza son realizadas por el instrumento, eliminando así la colocación repetitiva, tediosa, e inconsistente de los elementos de fibra óptica y la limpieza manual.
En este estudio, los datos se presentan en la cuantificación de ADN y proteínas, así como sobre la reproducibilidad y precisión. Contacto automático de muestras y análisis rápido permite la medición en tres segundos, lo que resulta en un rendimiento excelente. El análisis de datos se realiza mediante las características integradas en el software. La fórmula utilizada para calcular la concentración de ADN es la siguiente:
Concentración de la muestra = DF · (DO260-OD320) · FNCA (1)
Donde DF = factor de dilución de la muestra y la FNCA = factor de concentración de ácidos nucleicos.
El factor de concentración de ácido nucleico se establece de conformidad con el analito seleccionado 1.
Resultados de concentración de proteínas se puede expresar como mg / mL o como moles / L mediante la introducción de e280 y los valores de peso molecular, respectivamente. Cuando los valores de residuos de Tyr, Trp y cisteína (SS de bonos) son introducidos en la pestaña e280Calc, los valores de coeficiente de extinción se calculan como e280 = 5500 x (residuos de Trp) + 1490 x (residuos de Tyr) + 125 x (cisteína SS de bonos) . El valor e280 es utilizado por el software para el cálculo de la concentración.
Además de la determinación de la concentración de los ácidos nucleicos y proteínas, la BioSpec-nano puede ser utilizado como un ultra-micro volumen espectrofotómetro para muchos otros analitos, o como un espectrofotómetro estándar con 5 células de paso de luz mm.
El BioSpec-nano ha sido diseñado para resolver los problemas actuales inherentes a los métodos de cuantificación de ADN, tales como inconsistencias en los resultados y el trabajo manual tedioso. Cada medida tiene tan sólo 3 segundos, lo que permite un biólogo molecular con experiencia para analizar varias muestras de 3-6 en un minuto. La función del limpiador único no sólo mejora el rendimiento de la medición, sino que también elimina la necesidad de limpieza manual de los soportes, lo que resulta insignificante en el remanente entre las mediciones. Además, las pruebas con tan solo 2 toallitas para muestras de ADN que contiene 1000 ng / mL, indicó arrastre a menos de 2 ng / mL.
La disponibilidad de una celda de 5 mm de paso de luz proporciona una opción para analizar los ácidos nucleicos y diluir las muestras de proteínas y se extiende el uso de este instrumento para otras aplicaciones.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tip | Company | Catalogue Number | Comment |
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BioSpec-nano | Shimadzu | |||
Calf Thymus DNA | Sigma Aldrich | |||
Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich |