8-iyi Odası Slayt in vitro Biyofilm Oluşumu

1 Vitro Biyofilm Oluşumu Bakteri kolonileri (geceleme uygun agar yetiştirilen olduğunuz), medya askıya alındı ​​ve 490 OD 0.65 'ye kadar ayarlanabilir Sonucunda bakteriyel süspansiyon sonra 01:06 (1 ml bakteriyel süspansiyon + 5 ml önceden ısıtılmış orta) seyreltilir ve 37 ° C, yaklaşık 3 saat boyunca% 5 CO 2 ile orta-log fazı ulaşmak için inkübe edildi . 8-iyi bir oda slayt her kuyuya, önceden ısıtılmış medya ve yer seyreltme 200 mcL orta-log büyüme süspansiyon 1:2500 sulandırınız. 37 ° ° C'de% 5 CO 2 ile inkübe edin. Sonra yaklaşık 16 saat, aspirat, her odanın köşesinden orta ve 200 mcL taze, önceden ısıtılmış orta eklemek şekilde oda içinde biyofilm bozabilir kesme kuvvetleri oluşturmak için odasının duvar boyunca dağıtmak. 24 saat daha uzun kuluçka, orta, her 12 saatte değiştirmek ya da bakteri canlılığını korumak için gerekli. 2. Biyofilm, görselleştirilmesi Yukarıda açıklandığı gibi, her iki meclisin de orta aspire ve yerleşik biyofilm steril serum fizyolojik ile iki kez hafifçe yıkayın. Her iyi BacLight Ölü / Canlı leke (3 mcL bileşeni tuzlu mL başına + 3 mcL bileşeni B) 200 mcL ekleyin ve 15 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. Bu noktadan itibaren ışık kültür koruyun. Leke aspire ve daha önce olduğu gibi steril tuzlu su ile hafifçe iki kez yıkayın. Her iyi formalin tamponlu nötr 200 mcL ekleyin ve örnek düzeltmek için oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Fiksatif çıkarın ve kurumsal kurallarına uygun olarak bertaraf edilmelidir. Iki kez tuzlu su ile yıkayın ve yukarıdaki gibi formalin içeren yıkama sıvıları atmayın. Bir lamel conta yerleştirilir, hiçbir hava kabarcığı mevcut olduğunu, slayt plastik kuyu çıkarın her tuzlu eklemek yeterli. Montaj orta lamel lamel ve conta kenarları. Tırnak cilası, ancak slaytlar kalıcı olmayacaktır slaytlar mühür kullanılabilir. Mastik mikroskobu aracılığıyla incelenmesi için yaklaşık 1 saat önce kuruması için bekleyin. 3. Sonuçlar Şekil 1. 8-iyi odasının slayt oluşan bir biyofilm Temsilcisi 3D kompozit görüntüler. Bakteriler Live / Dead leke neyin canlı bakteri ile etiketlenmiş yeşil ve ölü bakteriler kırmızı floresan floresan. Tüm biyofilm kuleleri ve su kanalları ile farklı mimari gösteren (A) Bileşik görüntü. (B) 'de olduğu gibi aynı biyofilm (A), şimdi kesiti görülmektedir.