在体外生物膜的形成以及8商会幻灯片

在体外生物膜的形成1。 细菌菌落（已在适当的琼脂隔夜增长），暂停在媒体和外径490调整为0.65 由此产生的细菌悬浮液再稀释1:6（1 mL的菌悬液+ 5毫升预热中等），孵育37℃，5％CO 2约3小时，以达到中期日志阶段。 中期日志增长悬挂1:2500稀释与预热媒体和200μL稀释成每孔8室幻灯片。 在37 ° C孵育5％的CO 2。 经过约16小时，吸媒介，从每个会议厅的角落，并添加200μL新鲜，预热介质 – 沿腔壁免除，以免内建立的商会，这可能会破坏生物膜的剪切力。 如果孵化时间超过24小时，改变培养基，每12小时或需要保持细菌的生存能力。 2。生物膜的可视化吸如上所述，从每一个分庭的媒介，并用无菌生理盐水洗两次轻轻居民生物膜。 新增200 BacLight活/死染色（3μL的组件A + 3μL每毫升生理盐水组件B）μL，每口井，并在室温下孵育15分钟。从这个点开始，从保护文化。 吸干污渍，并用无菌生理盐水洗两次轻轻地像以前一样。 加入200μL的中性福尔马林每口井和30分钟，在室温下孵育修复标本。 固定液中取出，并妥善处置，按照机构准则。 用生理盐水洗两次澡洗的液体含有上述福尔马林和处置。 从幻灯片中删除的塑料井，补充足够的生理盐水，每孔使盖玻片置于垫片时，无气泡存在。 盖玻片和密封的安装介质盖玻片边缘。指甲油可以用密封的幻灯片，但幻灯片不会成为永久。 允许密封胶干燥约1小时前，通过显微镜检查。 3。结果 图1 8室幻灯片中形成生物膜复合代表性的三维图像。细菌活/死染色其中活菌荧光标记的绿色和死菌荧光红色。 （一）综合整个呈现出不同的体系结构与塔和水通道的生物膜的形象。 （二）在同一生物膜（一），现在看到的横截面。