3D 배양 지하 막 분석: 세포 침공을 연구하기 위해 3D 지하 막 단백질 매트릭스에 암세포를 배양

Published: April 30, 2023

Abstract

출처: Cvetković, D., . 3차원(3D) 모델을 이용한 유방암 세포 침습성의 정량화. J. Vis. Exp. (2014).

이 비디오는 3D 지하 막 단백질 매트릭스에서 유방암 세포를 성장시키는 상세한 방법론을 제공하여 주변 환경으로의 세포 침입 평가에서 3D 배양의 잠재력을 예시합니다.

Protocol

1. 지하 막 매트릭스에서 유방암 세포의 3 차원 배양 (임베먼트 기술) 마모리겔 지하 멤브레인 매트릭스 처리: 4°C에서 하룻밤 동안 얼음에 해동. 지하 멤브레인 매트릭스는 저온에서 액체이지만 실온에서 고화됩니다. 얼음에 지하 막 매트릭스를 유지(그림 1A-B). 나선형 패턴으로 P-200 Pipetman의 끝을 사용하여 매트릭스를 확산시켜 지하 멤브레인 매트릭스의 5…

Representative Results

그림 1. 지하 막 매트릭스에서 MDA-MB-231 유방암 세포의 3차원 배양 (임베디드 기술). A-B) 실험용 설정의 회로도(연기 후드에서 수행). C) 지하 멤브레인 매트릭스의 50 μl로 코팅 유리 바닥 접시의 우물. D) 접시(es)는 세포 배양 인큐베이터(37°C에서 5% CO2)에 배치되어 매트릭스가 적어도 30분 동안 고화되는 것을 허용하였다. F) ?…

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes MatTek Corporation P35G-1.0-14-C Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA) BioShop ALB003.100 Used at 3% for IF
1.5 ml tubes VWR CA10011-700 CA10011-700
100-mm culture dish BD353003 VWR CABD353003 Sterile, disposable
15 ml Falcon tube VWR CA21008-918 Sterile, disposable
1 ml filtered tips VWR 10011-350 Sterile, disposable
200 μl filtered tips VWR 22234-016 Sterile, disposable
20 μl filtered tips VWR 22234-008 Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS) Sigma F1051 Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine Life Technologies 11875-119 Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) Lonza CC-3150 Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope Olympus Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)

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Bu Makaleden Alıntı Yapın
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).

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