L’optogénétique permet l’utilisation de la lumière pour manipuler les neurones génétiquement modifiés pour exprimer des protéines spécifiques sensibles à la lumière dont l’activation de la lumière déclenche un changement dans l’état du neurone. Ici nous décrivons une approche optogénétique dans Drosophila utilisant l’opsin Channelrhodopsin2. Le protocole d’exemple comporte un essai optogénétique réglé pour étudier les circuits neuronaux derrière le comportement d’évasion de la mouche.
Protocol
Ce protocole est un extrait de de Vries et Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Générer des mouches channelrhodopsin Cross UAS-ChR2 vole avec le pilote Gal4 de votre choix, nous utilisons G105-Gal4, qui est exprimé en neurones Foma-1 dans le lobe optique. Pour éliminer la possibilité d’une réponse visuelle à la stimulation de la lumière bleue, les deux lignes de mouche sont dan…
Representative Results
Figure 1 : Installation expérimentale montrant la plate-forme avec le support vertical et les quatre bras de refroidissement qui retiennent les puits de chaleur avec des tableaux LED qui leur sont apposés. (A) La mise en place sous éclairage ambiant. (B) La mise en place lorsque les LED sont éclairées. (C) Une vue rapprochée vers le haut d’une LED de Tri-Star sur …
Materials
Reagent
All-trans Retinal
Advance Scientific Chemical Inc
R3041
Equipment
Heat Sink 9.2 C/W
Luxeonstar
LPD30-30B
30 mm square X 30 mm high
Carclo 18° Tri-Lens
Luxeonstar
10507
Blue Rebel LED on Tri-Star Base
Luxeonstar
MR-B0030-20T
470 nm, 174 lm @ 700 mA.
700 mA BuckPuck DC Driver
Luxeonstar
3021-D-E-700
Wiring Harness for BuckPuck Driver
Luxeonstar
3021-HE
Pre-cut thermal adhesive tape
Luxeonstar
LXT-S-12
20 mm Hex Base
Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID
McMaster-Carr
5307K49
Snap-Loc Coolant Hose Connector
McMaster-Carr
5307K39
¼" NPT Male
Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply