Microiniezione di cellule infermiere Drosophila: un metodo di consegna intracellulare

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Catrina, I. E., et al. J. Vis. Exp. (2019).

A causa delle loro grandi dimensioni e dell’organizzazione relativamente semplice, le cellule infermiere Drosophila sono ideali per gli studi di imaging di cellule vive. Questo video descrive un metodo di microiniezione per la consegna di composti esogeni nelle cellule, e il protocollo in primo piano dimostra la procedura con sonde oligonucleotidi fluorescenti chiamate fari molecolari (MB) utilizzati per visualizzare trascrizioni di mRNA endogeno.

Protocol

Questo protocollo è tratto da Catrina et al., Visualizzando e monitorando mRNA endogeni in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Progettazione di MB per l’imaging di cellule vive Piegare la sequenza di RNA di destinazione per prevedere la struttura secondaria della destinazione dell’mRNA utilizzando la “forma RNA” dal server mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_bla…

Materials

Spectrofluorometer Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon n/a Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette Fireflysci (former Precision Cells Inc.) 701MFL
Dumont #5 tweezer World Precision Instruments 501985 Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700 Sigma-Aldrich H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm VWR 48393-048
Dissecting microscope Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad Genesee Scienific 59-114
Tris-HCL pH 7.5 Sigma-Aldrich 1185-53-1
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 7791-18-6
NaCl Sigma-Aldrich 7647-14-5
Spinning disc confocal microscope Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera Hamamatsu n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator Eppendorf Inc. 920000037
FemtoJet Microinjector Eppendorf Inc. 920010504
Injection needle: Femtotips II Eppendorf Inc. 930000043
Loading tip: 20 μL Microloader Eppendorf Inc. 930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm VWR 48393-026; 48393-172
Dry yeast Any grocery store n/a
Computer, > 20 GB RAM Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing

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Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).

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