هذا المنشور يصف كيفية استخدام الأنواع السمكية اجيلنت نظام تحديد الهوية لتحديد الأنواع من السمك عن طريق استخراج الحمض النووي وتنفيذ وتحليل PCR RFLP.
قمنا بتطوير سريع ، وبسيط ، ودقيق طريقة الفرز المعتمدة على الحمض النووي للتعرف على أنواع الأسماك الموجودة في عينات من المأكولات البحرية الطازجة والمصنعة. هذا الأسلوب تنوعا توظف PCR التضخيم من الحمض النووي المستخرج من عينات الجينومية الأسماك ، يليها تحليل تقييد طول القطعة (RFLP) تعدد الأشكال لتوليد أنماط جزء لا يمكن حلها على Bioanalyzer 2100 اجيلنت ومطابقة لهذا النوع الصحيح باستخدام البرمجيات RFLP نمط مطابقة.
تحديد أسلوب يستخدم الأسماك وموثوق بها بسيطة ، وتدور العمود القائم على بروتوكول لعزل الحمض النووي من عينات الأسماك. تعامل مع عينات K بروتيناز للافراج عن الأحماض النووية في الحل. ثم يتم عزل الحمض النووي من خلال تعليق العينة في المخزن ملزمة وتحميلها على فنجان تدور الصغيرة المحتوية على الألياف مصفوفة السيليكا مقرا لها. والأحماض النووية في ربط نموذج لمصفوفة من الألياف. تغسل الأحماض النووية يجمد لإزالة الملوثات ، ويتم استرداد مجموع الحمض النووي في الحجم النهائي من 100 ميكرولتر. عزل الحمض النووي مستعدة لتضخيم PCR مع الاشعال شريطة ربط تسلسل الجينوم وجدت في جميع الأسماك. يتم هضمها ثم المنتجات PCR مع ثلاثة انزيمات تقييد مختلفة وحلها على Bioanalyzer اجيلنت 2100. ويمكن استخدام جزء أطوال المنتجة في التفاعلات الهضم لتحديد الأنواع من الأسماك التي أعدت عينة من الحمض النووي ، وذلك باستخدام برامج التصفح نمط RFLP قاعدة بيانات تحتوي على أنماط RFLP تجريبيا المستمدة من أنواع الأسماك ذات الصلة تجاريا.
نظهر بسيطة وسريعة ودقيقة طريقة الفرز المعتمدة على الحمض النووي لتحديد الأنواع السمكية في منتجات المأكولات البحرية. يوفر هذا الأسلوب قوية استنساخه ، ونتائج دقيقة في أقل من يوم عمل واحد ، ويمكن تطبيقه في مرافق الاختبار بسبب البروتوكولات التجارية وتبسيط الإعداد بسيطة. ويتميز هذا الجيل من المعطيات الموضوعية التي يتم تحليلها باستخدام برامج فك RFLP مع قاعدة بيانات قابلة للتوسيع التجربة المستمدة من التشكيلات أنواع الأسماك.
مع تنفيذ روتينية ، وهذه الطريقة اختبار لديه القدرة على منع mislabeling من منتجات المأكولات البحرية ، والمساعدة في الحفاظ على سجلات دقيقة مناسبة للامتثال للوائح الحكومية.
The authors have nothing to disclose.
اجيلنت Stratagene قسم المنتجات
Material Name | Tip | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Agilent 2100 Bioanalyzer (with chip priming station and IKA vortex mixer) | Agilent | G2939AA | ||
Agilent 2100 Bioanalyzer laptop & Expert Software | Agilent | G2953CA | G2950CA – desktop PC & Expert Software | |
Agilent Bioanalyzer DNA 1000 Reagent Kit (part #5067-1504) | Agilent | 5067-1504 | ||
Thermal Cycler | Various | Various | ||
PCR Strip Tubes | Agilent | 401428 | ||
PCR Strip Caps | Agilent | 401425 | ||
96-Well Working Rack | Agilent | 410094 | ||
Fish Species Identification System DNA Isolation Kit | Agilent | İletişim | ||
Fish Species Identification System PCR-RFLP Reagent Kit | Agilent | İletişim | ||
RFLP Matcher Software | Agilent | İletişim | ||
100% ethanol, 200 proof (USP grade or equivalent) | Various | Various | ||
Sterile, nuclease-free water | Various | Various | ||
Pipettors | Various | Various | ||
Incubator or water bath set to 65°C | Various | Various | ||
Sterile glass bottle or polypropylene tube (e.g. 14-ml BD Falcon polypropylene) | Various | Various | ||
round-bottom tubes or 50-ml BD Falcon polypropylene conical tubes) | Various | Various | ||
Vortex mixer | Various | Various | ||
Microcentrifuge | Various | Various | ||
Microcentrifuge tubes 1.5ml | Various | Various | ||
Tube rack 1.5ml | Various | Various | ||
Pipette Tips | Various | Various |