特定の組織型から解離し細胞が組織aggitationのための特定のパラメータは、実行可能な、培養可能な細胞の大量を取得する必要があります。ミルテニーgentleMACS Dissociatorは、シンプルで実用的なプロトコルを使用してこのタスクを最適化します。本書ではnerual組織でこの装置の使用は説明されています。
神経系の中で、神経細胞およびグリア細胞の数百種類が記載されている。脳または脊髄内の各特定の細胞型は、細胞表面分子、またはそれを特定して特徴付けることができるような分子決定因子、のレパートリーを持っています。現在のところ、堅固な細胞の同定と分離技術は、同時に特徴的な表面タンパク質の細胞死と破壊を制限しながら、生成される単一セルの準備が必要です。抗原のエピトープを保持し、細胞の損失を制限しながら、トリプシンやパパインベースの解離キットと組み合わせて使用されるgentleMACS Dissociatorは、効果的かつ穏やかに脳組織を切り離すことができます。単一の細胞懸濁液の標準化された製剤は、Cチューブと最適化された、プリセットgentleMACSプログラムを使用して実現されます。一度生成された、単細胞懸濁液は、神経前駆細胞を識別する、またはミエリンの除去のビーズを使用してさらに精製した抗プロミニン- 1マイクロビーズのようなモノクローナルコンジュゲートで治療することができます。
gentleMACS Dissociatorは閉鎖系での神経組織から単細胞懸濁液の標準化の準備を容易にします。神経組織の解離のキットはimmunostainingsと免疫磁気細胞分離1から5のような、さらにアプリケーションに必要な抗原のエピトープを保持するために最適化されています。このプロトコルでは、97%生存細胞に降伏、gentleMACS Dissociatorと神経組織解離キット(P)を使用してマウスの脳の穏やかな酵素的解離を示す。宿主組織の年齢に応じて、5 × 10 6と1 × 10 7細胞、間に神経組織の収量100 mgの。標的プロミニン- 1 +細胞は、抗プロミニン- 1 MicroBeadsを用いて単離し、その後、文化に取り込まれた。プロトコルは、マウス> P7由来の神経組織で作業するときミエリン除去ビーズの追加使用でさらに効果的であることが示されている。
The authors have nothing to disclose.