Extraction du venin de la guêpe parasitoïde Trichogramma dendrolimi à l’aide d’un hôte artificiel
Summary
Nous présentons ici un protocole d’extraction du venin de Trichogramma dendrolimi à l’aide d’un hôte artificiel créé avec un film de polyéthylène et une solution d’acides aminés.
Abstract
Les guêpes parasitoïdes sont un groupe diversifié d’insectes hyménoptères qui constituent des ressources inestimables pour la lutte biologique contre les ravageurs. Pour assurer un parasitisme réussi, les guêpes parasitoïdes injectent du venin dans leurs hôtes pour supprimer l’immunité de leurs hôtes, moduler le développement, le métabolisme et même le comportement des hôtes. Avec plus de 600 000 espèces estimées, la diversité des guêpes parasitoïdes dépasse celle d’autres animaux venimeux, tels que les serpents, les escargots coniques et les araignées. Le venin de guêpe parasitoïde est une source sous-explorée de molécules bioactives avec des applications potentielles dans la lutte antiparasitaire et la médecine. Cependant, la collecte du venin parasitoïde est difficile en raison de l’impossibilité d’utiliser la stimulation directe ou électrique et de la difficulté de dissection en raison de leur petite taille. Trichogramma est un genre de minuscules guêpes parasitoïdes d’œufs (~0,5 mm) qui sont largement utilisées pour la lutte biologique contre les lépidoptères ravageurs dans l’agriculture et les forêts. Nous rapportons ici une méthode d’extraction du venin de T. dendrolimi à l’aide d’hôtes artificiels. Ces hôtes artificiels sont créés avec un film de polyéthylène et des solutions d’acides aminés, puis inoculés avec des guêpes Trichogramma pour le parasitisme. Le venin a ensuite été recueilli et concentré. Cette méthode permet d’extraire de grandes quantités de venin de trichogramme tout en évitant la contamination d’autres tissus causée par la dissection, un problème courant dans les protocoles de dissection de réservoir de venin. Cette approche innovante facilite l’étude du venin de Trichogramma , ouvrant la voie à de nouvelles recherches et applications potentielles.
Introduction
Les guêpes parasitoïdes sont des insectes hyménoptères parasites qui sont des ressources importantes pour la lutte biologique1. Il existe une grande variété de guêpes parasitoïdes, avec plus de 600 000 espèces estimées2. La diversité des guêpes parasitoïdes dépasse de loin celle d’autres arthropodes venimeux, tels que les serpents, les escargots coniques, les araignées, les scorpions et les abeilles. Le venin est un facteur parasitaire important chez les guêpes parasitoïdes. Pour un parasitisme réussi, le venin est injecté dans l’hôte, modulant le comportement, l’immunité, le développement et le métabolisme de l’hôte3. De plus, le venin des guêpes parasitoïdes présente une diversité remarquable dans ses structures moléculaires, ses cibles et ses fonctions, reflétant une coévolution complexe avec leurs hôtes. Ainsi, le venin parasitoïde est une ressource précieuse et sous-estimée de molécules actives à des fins insecticides ou médicales4. Contrairement au venin des serpents, des escargots coniques, des araignées, des scorpions et des abeilles, le venin de guêpe parasitoïde ne peut pas être collecté par stimulation directe ou par stimulation électrique5. La méthode actuelle d’extraction du venin de guêpe parasitoïde consiste à disséquer le réservoir de venin. Cependant, les guêpes parasitoïdes sont souvent petites, et la dissection des guêpes parasitoïdes nécessite des compétences techniques élevées. Par conséquent, si nous pouvons trouver un moyen de collecter le venin des guêpes parasitoïdes de manière efficace et pratique, il sera d’une grande aide de rechercher le venin des guêpes parasitoïdes.
Trichogramma (Hymenoptera : Trichogrammatidae) est un genre de guêpes parasitoïdes minuscules (~0,5 mm de long)6. Ces guêpes sont parmi les agents de lutte biologique les plus utilisés, ciblant particulièrement les œufs de divers lépidoptères ravageurs dans l’agriculture et les forêts. Par exemple, T. dendrolimi, l’une des espèces de trichogrammes les plus utilisées en Chine, a été largement utilisé pour lutter contre une variété de ravageurs agricoles et forestiers, tels que Dendrolimus superans, Ostrinia furnacalis et Chilo suppressalis. Des études antérieures ont montré que les guêpes trichogrammes pouvaient injecter leurs œufs dans des hôtes artificiels7. Les hôtes artificiels peuvent être créés à l’aide de matériaux tels que la cire8, l’agar9, le parafilm10 et le film plastique11. La solution dans les hôtes artificiels qui induit une ponte suffisante pour les trichogrammes peut être simple, comme les acides aminés ou les sels inorganiques12. Sur la base de la caractéristique selon laquelle T. dendrolimi peut parasiter des hôtes artificiels, cette étude fournit une nouvelle méthode pour extraire le venin des guêpes parasitoïdes à l’aide d’hôtes artificiels. Cette approche vise à remédier aux lacunes du faible rendement, de la faible pureté et de la sensibilité à la contamination dans les techniques d’extraction actuelles. En utilisant cette méthode, une grande quantité de venin de haute pureté de T. dendrolimi peut être extraite, ce qui répond aux besoins de la recherche scientifique et du criblage de molécules bioactives à des fins insecticides ou médicales.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous présentons ici une méthode d’extraction du venin de T. dendrolimi à l’aide d’hôtes artificiels. Les points clés de l’expérience de collecte de venin sont les suivants. (1) Au cours de la préparation, T. dendrolimi doit être anesthésié rapidement avec une concentration appropriée de CO2. Si la concentration de CO2 est trop faible, elle sera insuffisante pour anesthésier rapidement les trichogrammes . À l’inverse, si la concentration est trop éle…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions le soutien financier de la Fondation des sciences naturelles de la province de Hainan (subvention n° 323QN262), de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subvention n° 31701843 et 32172483), du Fonds d’innovation pour la science et la technologie agricoles du Jiangsu (subvention n° 323QN262). CX(22)3012 et CX(21)3008), la Fondation « Shuangchuang Doctor » de la province du Jiangsu (subvention n° 202030472) et le fonds de démarrage de l’Université agricole de Nanjing (subvention n° 804018).
Materials
| 10 μm Nylon Net | Millipore | NY1002500 | For filtering the eggs |
| 10% Polyvinyl alcohol | Aladdin | P139533 | For attractting T. dendrolimi to lay eggs |
| 10% Sucrose water | Sinopharm Chemical Reagent | 10021463 | Feed Trichogramma dendrolimi |
| 4x LDS loading buffer | Ace Hardware | B23010301 | SDS-PAGE |
| Collection box | Deli | 8555 | Container for T. dendrolimi parasitism |
| Future PAGE 4–12% (12 wells) | Ace Hardware | J70236502X | SDS-PAGE |
| GenScript eStain L1 protein staining apparatus | GenScript | L00753 | SDS-PAGE |
| Glass grinding rod | Applygen | tb6268 | Semicircular protrudations |
| L- Leucine | Solarbio | L0011 | Artificial host components |
| L-Histidine | Aladdin | A2219458 | Artificial host components |
| L-Phenylalanine | Solarbio | P0010 | Artificial host components |
| Mini-Centrifuges | Scilogex | D1008 | Centrifuge |
| MOPS-SDS running buffer | Ace Hardware | B23021 | SDS-PAGE |
| Omni-Easy Instant BCA protein assay kit | Shanghai Yamay Biomedical Technology | ZJ102 | For esimation of venom protein concentration |
| PCR plate layout of 96 holes | Thermo Fisher | AB1400L | Semicircular protrudations |
| Polyethylene plastic film | Suzhou Aopang Trading | 001c5427 | Artificial egg card |
| Prestained color protein marker(10–180 kDa) | YiFeiXue Biotech | YWB007 | SDS-PAGE |
| Rubber band | Guangzhou qianrui biology science and technology | 009 | Tighten the plastic film and the collection box |
| Silicone rubber septa mat, 96-well, round hole | Sangon Biotech | F504416-0001 | Semicircular protrudations |
References
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