Summary

Ein katheterbezogenes Candida albicans-Infektionsmodell in der Maus

Published: March 22, 2024
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Summary

Wir etablieren ein Mausmodell der C.albicans-assoziierten katheterassoziierten Infektion (CRI), in dem sich Biofilm auf dem Katheter bildet und die Interaktion zwischen C.albicans und Wirt gut mit der klinischen CRI korreliert. Dieses Modell hilft beim Screening von Therapien für C.albicans-Biofilm-assoziierte CRI und legt damit den Grundstein für die klinische Transformation.

Abstract

Die katheterassoziierte Infektion (CRI) ist eine häufige nosokomiale Infektion, die durch Candida albicans während der Katheterimplantation verursacht wird. Typischerweise bilden sich Biofilme auf der Außenfläche des Katheters und führen zu disseminierten Infektionen, die für die Patienten tödlich verlaufen. In Kliniken gibt es kein effektives Präventions- und Behandlungsmanagement. Daher ist es dringend erforderlich, ein Tiermodell für CRI für das präklinische Screening neuer Strategien zur Prävention und Behandlung zu etablieren. In dieser Studie wurde ein Polyethylen-Katheter, ein weit verbreiteter medizinischer Katheter, nach der Haarentfernung in den Rücken der BALB/c-Mäuse eingeführt. Candida albicans ATCC MYA-2876 (SC5314), das ein verstärktes grün fluoreszierendes Protein exprimiert, wurde anschließend entlang des Katheters auf der Hautoberfläche inokuliert. 3 Tage später wurde unter einem Fluoreszenzmikroskop eine intensive Fluoreszenz auf der Oberfläche des Katheters beobachtet. Mittels Rasterelektronenmikroskopie wurden reife und dicke Biofilme auf der Oberfläche des Katheters gefunden. Diese Ergebnisse deuten auf die Adhäsion, Besiedlung und Biofilmbildung von Candida albicans auf der Katheteroberfläche hin. Die Hyperplasie der Epidermis und die Infiltration von Entzündungszellen in die Hautproben deuteten auf die histopathologischen Veränderungen der CRI-assoziierten Haut hin. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass es gelungen ist, ein Maus-CRI-Modell zu etablieren. Es wird erwartet, dass dieses Modell bei der Erforschung und Entwicklung des therapeutischen Managements für Candida albicans-assoziierte CRI hilfreich sein wird.

Introduction

In den letzten Jahren haben sich mit der Entwicklung und Anwendung biomedizinischer Materialien implantatbedingte Infektionen als schwierige klinische Probleme herauskristallisiert 1,2. Mit der breiten Anwendung von medizinischen Kathetern in Kliniken ist die Zahl der damit verbundenen Infektionen und Todesfälle jedes Jahr enorm 3,4. Zu den häufigsten Infektionswegen einer katheterbedingten Infektion (CRI) gehören: (1) Krankheitserreger auf der Hautoberfläche infiltrieren in den Körper und haften an der Außenfläche des Katheters 5,6,7; (2) unsachgemäße aseptische Krankheitserreger dringen in den Katheter ein, haften an ihm und besiedeln ihn; (3) Krankheitserreger im Blutkreislauf haften am Katheter und siedeln sich an; (4) Arzneimittel, die mit pathogenen Mikroorganismen kontaminiert sind.

Candida ist der dritthäufigste Grund für CRI 8,9. Es ist sehr wahrscheinlich, dass es zu einer Blutstrominfektion und anderen lebensbedrohlichen invasiven Candidiasis kommt, nachdem sich Biofilme auf der Oberfläche des Implantats gebildet haben. Die Prognose ist schlecht und die Sterblichkeitsrate hoch2. Es wird berichtet, dass sich innerhalb von 2 Wochen nach dem Einführen der Zentralvenen Biofilme auf der Oberfläche des Katheters und einige Wochen später im Lumen des Katheters bilden10,11.

Candida albicans (C. albicans) Biofilme, die auf medizinischen Kathetern gebildet werden, weisen ein doppelschichtiges Netzwerk aus Hefe, Stroma und Myzel auf12,13. Die Bildung von Biofilmen von C. albicans ist nicht nur ein Schlüssel für Arzneimittelresistenz und Immunevasion13, sondern auch entscheidend für die Produktion von disseminierten Sporen, was zu einer weiteren hämatogenen Infektionführt 2,12 und zu schwerwiegenderen und sogar lebensbedrohlichen Folgen führt. C. albicans-assoziierte CRI ist eine der Hauptursachen für klinische Pilzinfektionenim Blutkreislauf 7,14, und mehr als 40 % der Patienten mit C. albicans-Infektion im zentralen Venenkatheter entwickeln sich zu einer Bakteriämie15.

Nach Angaben der Infectious Disease Society of America umfasst die empfohlene Behandlung von Candida CRI (1) die Entfernung des infizierten Katheters; (2) die Patienten einer 14-tägigen systemischen antimykotischen Therapiezu unterziehen 8; (3) Reimplantation eines neuen Katheters4. In der klinischen Anwendung können Katheter jedoch manchmal nicht vollständig entfernt werden. Einige Patienten können nur mit systemischen Antibiotika und einer antimikrobiellen Lock-Therapie behandelt werden, die mit starken Nebenwirkungen einhergeht16,17.

Bestehende Tiermodelle von C. albicans, wie z. B. das oropharyngeale Candidiasis-Modell, das vaginale Candidiasis-Modell und das invasive systemische Infektionsmodell, das durch Candidiasis verursacht wird18,19, können nicht gut mit dem klinischen CRI korrelieren. Daher wurde in dieser Studie ein C. albicans-assoziiertes CRI-Modell in Mäusen etabliert. Als subkutane Implantate wurden klinisch häufig verwendete Polyethylenkatheter verwendet20,21, und C. albicans wurden auf die Hautoberfläche inokuliert, um die Adhäsion von C. albicans an den medizinischen Kathetern und die Bildung von Biofilmen zu simulieren.

Dieses Modell wurde in unserem Labor erfolgreich eingesetzt, um die Anti-Biofilm-Wirkung verschiedener Therapeutika zu untersuchen22. Darüber hinaus wurde aufgrund der verzögerten Detektion von C. albicans nach Katheterinfektion ein C. albicans-Stamm mit verstärktem grün fluoreszierendem Protein (EGFP) konstruiert und in Mäusen inokuliert, um die intuitive Beobachtung der Kolonien und Biofilme von C. albicans auf dem implantierten Katheter zu erleichtern.

Protocol

Die Versuchstiere, männliche BALB/c-Mäuse (12-16 g), wurden vom Laboratory Animal Center des Xi’an Jiaotong University Health Science Center gekauft. Alle Verfahren wurden vom Institutional Animal Ethics Committee der Xi’an Jiaotong University mit der Lizenznummer SCXK (Shaanxi) 2021-103 genehmigt. 1. Vorbereitung des Puffers und der Ausrüstung Transfect C. albicans-Stämme mit einem hochexprimierten Plasmid pCaExp.Kaufen Sie C. albicans …

Representative Results

Die C. albicans und Biofilme auf den Kathetern konnten vom REM beobachtet werden. Wie in Abbildung 322 gezeigt, war die Oberfläche der Polyethylenkatheter in der Kathetergruppe glatt, und es wurden keine anhaftenden pathogenen Mikroorganismen beobachtet. Auf der Oberfläche der Polyethylenkatheter in der Modellgruppe waren jedoch reife und dichte C. albicans-Biofilme sichtbar, was darauf hindeutet, dass C. albicans unter den experimentellen…

Discussion

CRI ist eine der häufigsten nosokomialen Infektionen in der klinischen Praxis23. Krankheitserreger in den Hautanhangsgebilden, wie Epidermis, Talgdrüsen und Haarfollikeln, sind mögliche Ursachen für CRI23,24. Candida ist der drittgrößte Erreger, der CRI verursacht, wobei Candida albicans die häufigste Form der Biofilminfektion war25,26. Daher haben wir uns …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir sind dankbar für die finanzielle Unterstützung durch die Natural Science Foundation of Shaanxi Province (Fördernummer 2021SF-118) und die National Natural Science Foundation of China (Fördernummern 81973409, 82204631).

Materials

0.5 Mactutrius turbidibris Shanghai Lujing Technology Co., Ltd 5106063
2.5% glutaraldehyde fixative solution Xingzhi Biotechnology Co., Ltd DF015
4 °C refrigerator Electrolux (China) Electric Co., Ltd ESE6539TA
Agar Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd 01-023
Analytical balances Shimadzu ATX124
Autoclaves Sterilizer SANYO MLS-3750
Butanol Tianjin Chemio Reagent Co., Ltd 200-889-7
Carbenicillin Amresco C0885
Eclipse Ci Nikon upright optical microscope  Nikon Eclipse Ts2-FL
Glucose Macklin  D823520
Inoculation ring Thermo Scientific 251586
Isoflurane RWD 20210103
Paraformaldehyde Beyotime Biotechnology P0099
PAS dye kit Servicebio G1285
Peptone Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd 01-001
Polyethylene catheter Shining Plastic Mall PE100
RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine  RWD R550
SEM Hitachi TM-1000
Temperature incubator Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd ZQTY-50N
Ultrapure water water generator Heal Force NW20VF
Ultrasound machine Do-Chrom DS10260D
Xylene Sinopharm  Chemical Reagent Co., Ltd 10023428
Yeast extract Thermo Scientific Oxoid LP0021B

References

  1. Kojic, E. M., Darouiche, R. O. Candida infections of medical devices. microbiology reviews. 17 (2), 255-267 (2004).
  2. Giri, S., Kindo, A. J. A review of Candida species causing blood stream infection. Indian Journal of Medical Microbiology. 30 (3), 270-278 (2012).
  3. Weinstein, R. A., Darouiche, R. O. Device-associated infections: A macroproblem that starts with microadherence. Clinical Infectious Diseases. 33 (9), 1567-1572 (2001).
  4. Mermel, L. A., et al. Guidelines for the management of intravascular catheter-related infections. Clinical Infectious Diseases. 32 (9), 1249-1272 (2001).
  5. Seidler, M., Salvenmoser, S., Müller, F. -. M. C. In vitro effects of micafungin against Candida biofilms on polystyrene and central venous catheter sections. International Journal of Antimicrobial Agents. 28 (6), 568-573 (2006).
  6. Chaves, F., et al. Diagnosis and treatment of catheter-related bloodstream infection: Clinical guidelines of the Spanish Society of Infectious Diseases and Clinical Microbiology and (SEIMC) and the Spanish Society of Spanish Society of Intensive and Critical Care Medicine and Coronary Units (SEMICYUC). Medicina Intensiva. 42 (1), 5-36 (2018).
  7. Raad, I. I., Bodey, G. P. Infectious complications of indwelling vascular catheters. Clinical Infectious Diseases. 15 (2), 197-208 (1992).
  8. Paul DiMondi, V., Townsend, M. L., Johnson, M., Durkin, M. Antifungal catheter lock therapy for the management of a persistent Candida albicans bloodstream infection in an adult receiving hemodialysis. Pharmacotherapy. 34 (7), e120-e127 (2014).
  9. Bouza, E., Guinea, J., Guembe, M. The role of antifungals against candida biofilm in catheter-related candidemia. Antibiotics (Basel). 4 (1), 1-17 (2014).
  10. Raad, I., et al. Ultrastructural analysis of indwelling vascular catheters: a quantitative relationship between luminal colonization and duration of placement. The Journal of Infectious Diseases. 168 (2), 400-407 (1993).
  11. Yousif, A., Jamal, M. A., Raad, I. Biofilm-based central line-associated bloodstream infections. Advances in Experimental Medicine and Biology. 830, 157-179 (2015).
  12. Douglas, L. J. Candida biofilms and their role in infection. Trends in Microbiology. 11 (1), 30-36 (2003).
  13. Mack, D., et al. Biofilm formation in medical device-related infection. International Journal of Artificial Organs. 29 (4), 343-359 (2006).
  14. Schinabeck, M. K., et al. Rabbit model of Candida albicans biofilm infection: liposomal amphotericin B antifungal lock therapy. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (5), 1727-1732 (2004).
  15. Anaissie, E. J., Rex, J. H., Uzun, O., Vartivarian, S. Predictors of adverse outcome in cancer patients with candidemia. The American Journal of Medicine. 104 (3), 238-245 (1998).
  16. Fujimoto, K., Takemoto, K. Efficacy of liposomal amphotericin B against four species of Candida biofilms in an experimental mouse model of intravascular catheter infection. Journal of Infection and Chemotherapy. 24 (12), 958-964 (2018).
  17. Shuford, J. A., Rouse, M. S., Piper, K. E., Steckelberg, J. M., Patel, R. Evaluation of caspofungin and amphotericin B deoxycholate against Candida albicans biofilms in an experimental intravascular catheter infection model. The Journal of Infectious Diseases. 194 (5), 710-713 (2006).
  18. Koh, A. Y., Köhler, J. R., Coggshall, K. T., Van Rooijen, N., Pier, G. B. Mucosal damage and neutropenia are required for Candida albicans dissemination. PLoS Pathogens. 4 (2), e35 (2008).
  19. Tucey, T. M., et al. Glucose homeostasis is important for immune cell viability during candida challenge and host survival of systemic fungal infection. Cell Metabolism. 27 (5), 988-1006 (2018).
  20. Lawrence, E. L., Turner, I. G. Materials for urinary catheters: a review of their history and development in the UK. Medical Engineering & Physics. 27 (6), 443-453 (2005).
  21. Schumm, K., Lam, T. B. Types of urethral catheters for management of short-term voiding problems in hospitalized adults: a short version Cochrane review. Neurourology and Urodynamics. 27 (8), 738-746 (2008).
  22. Mo, F., et al. Development and evaluation of a film forming system containing myricetin and miconazole nitrate for preventing candida albicans catheter-related infection. Microbial Drug Resistance. 28 (4), 468-483 (2022).
  23. Balikci, E., Yilmaz, B., Tahmasebifar, A., Baran, E. T., Kara, E. Surface modification strategies for hemodialysis catheters to prevent catheter-related infections: A review. Journal of Biomedical Materials Research. Part B, Applied Biomaterials. 109 (3), 314-327 (2021).
  24. María, L. T., Alejandro, G. S., María Jesús, P. G. Central venous catheter insertion: Review of recent evidence. Best Practice & Research. Clinical Anaesthesiology. 35 (1), 135-140 (2021).
  25. Kojic, E. M., Darouiche, R. O. Candida infections of medical devices. Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 255-267 (2004).
  26. He, Y., et al. Retrospective analysis of microbial colonization patterns in central venous catheters, 2013-2017. Journal of Healthcare Engineering. 2019, 8632701 (2019).
  27. Mo, F., et al. In vitro and in vivo effects of the combination of myricetin and miconazole nitrate incorporated to thermosensitive hydrogels on C. albicans biofilms. Phytomedicine. 71, 153223 (2020).
  28. Cantón-Bulnes, M. L., Garnacho-Montero, J. Practical approach to the management of catheter-related bloodstream infection. Revista Espanola de Quimioterapia. 32 Suppl 2 (Suppl 2), 38-41 (2019).
  29. Böhlke, M., Uliano, G., Barcellos, F. C. Hemodialysis catheter-related infection: prophylaxis, diagnosis and treatment. The Journal of Vascular Access. 16 (5), 347-355 (2015).
  30. Fang, X., et al. Effects of different tissue specimen pretreatment methods on microbial culture results in the diagnosis of periprosthetic joint infection. Bone & Joint Research. 10 (2), 96-104 (2021).
  31. Naumenko, Z. S., Silanteva, T. A., Ermakov, A. M., Godovykh, N. V., Klushin, N. M. Challenging diagnostics of biofilm associated periprosthetic infection in immunocompromised patient: A clinical case. Open Access Macedonian Journal of Medical Sciences. 7 (5), 786-790 (2019).
  32. Cai, Y., et al. Metagenomic next generation sequencing improves diagnosis of prosthetic joint infection by detecting the presence of bacteria in periprosthetic tissues. International Journal of Infectious Diseases. 96, 573-578 (2020).
  33. Samanipour, A., Dashti-Khavidaki, S., Abbasi, M. R., Abdollahi, A. Antibiotic resistance patterns of microorganisms isolated from nephrology and kidney transplant wards of a referral academic hospital. Journal of Research in Pharmacy Practice. 5 (1), 43-51 (2016).
  34. Huang, G., Huang, Q., Wei, Y., Wang, Y., Du, H. Multiple roles and diverse regulation of the Ras/cAMP/protein kinase A pathway in Candida albicans. Molecular Microbiology. 111 (1), 6-16 (2019).
  35. Garlito-Díaz, H., et al. A new antifungal-loaded sol-gel can prevent candida albicans prosthetic joint infection. Antibiotics (Basel). 10 (6), 711 (2021).

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Cite This Article
Yang, C., Mo, F., Zhang, J., Zhang, P., Li, Q., Zhang, J. A Catheter-Related Candida albicans Infection Model in Mouse. J. Vis. Exp. (205), e65307, doi:10.3791/65307 (2024).

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