Monitoraggio della soglia elettrica a circuito chiuso in tempo reale open source per la ricerca traslazionale del dolore
Summary
APTrack è un plugin software sviluppato per la piattaforma Open Ephys che consente la visualizzazione dei dati in tempo reale e il monitoraggio della soglia elettrica a circuito chiuso dei potenziali d’azione neuronali. Abbiamo usato con successo questo in microneurografia per nocicettori umani in fibra C e nocicettori in fibra C e fibra Aδ di topo.
Abstract
I nocicettori sono una classe di neuroni afferenti primari che segnalano stimoli nocivi potenzialmente dannosi. Un aumento dell’eccitabilità dei nocicettori si verifica in condizioni di dolore acuto e cronico. Ciò produce un’attività in corso anomala o soglie di attivazione ridotte a stimoli nocivi. Identificare la causa di questa maggiore eccitabilità è necessario per lo sviluppo e la convalida di trattamenti basati sul meccanismo. Il tracciamento della soglia elettrica a singolo neurone può quantificare l’eccitabilità dei nocicettori. Pertanto, abbiamo sviluppato un’applicazione per consentire tali misurazioni e dimostrarne l’uso negli esseri umani e nei roditori. APTrack fornisce la visualizzazione dei dati in tempo reale e l’identificazione del potenziale d’azione utilizzando un grafico raster temporale. Gli algoritmi rilevano i potenziali d’azione superando la soglia e monitorano la loro latenza dopo la stimolazione elettrica. Il plugin modula quindi l’ampiezza della stimolazione elettrica utilizzando un metodo up-down per stimare la soglia elettrica dei nocicettori. Il software è stato costruito sul sistema Open Ephys (V0.54) e codificato in C ++ utilizzando il framework JUCE. Funziona su sistemi operativi Windows, Linux e Mac. Il codice open source è disponibile (https://github.com/ Microneurografia/APTrack). Le registrazioni elettrofisiologiche sono state prese da nocicettori sia in una preparazione di pelle di topo utilizzando il metodo della fibra stuzzicata nel nervo safeno sia in volontari umani sani utilizzando la microneurografia nel nervo peroneo superficiale. I nocicettori sono stati classificati in base alla loro risposta agli stimoli termici e meccanici, nonché monitorando il rallentamento dipendente dall’attività della velocità di conduzione. Il software ha facilitato l’esperimento semplificando l’identificazione del potenziale d’azione attraverso il grafico raster temporale. Dimostriamo il monitoraggio della soglia elettrica a circuito chiuso in tempo reale dei potenziali d’azione dei singoli neuroni durante la microneurografia umana in vivo, per la prima volta, e durante le registrazioni elettrofisiologiche ex vivo del topo di fibre C e Aδ. Stabiliamo la prova di principio dimostrando che la soglia elettrica di un nocicettore umano in fibra C sensibile al calore viene ridotta riscaldando il campo ricettivo. Questo plugin consente il tracciamento della soglia elettrica dei potenziali d’azione dei singoli neuroni e consente la quantificazione dei cambiamenti nell’eccitabilità dei nocicettori.
Introduction
I nocicettori sono neuroni afferenti primari nel sistema nervoso periferico che vengono attivati da eventi apertamente o potenzialmente dannosi per i tessuti e svolgono un ruolo protettivo critico nel dolore acuto1. Registrazioni elettrofisiologiche da nocicettori in fibra C e Aδ in modelli animali, volontari umani sani e pazienti hanno rivelato sensibilizzazione e attività spontanea anormale in una vasta gamma di condizioni di dolore 2,3,4,5,6,7. Comprendere i meccanismi che sono alla base di questi cambiamenti nell’eccitabilità dei nocicettori nei pazienti potrebbe consentire interventi terapeutici mirati8. Tuttavia, ci sono pochi strumenti per valutare direttamente l’eccitabilità dei nocicettori, in particolare nei pazienti9, ma il potenziale per l’utilità di tali strumenti è ben riconosciuto10,11.
Il monitoraggio della soglia elettrica del nervo intero può essere utilizzato per esaminare l’eccitabilità assonale negli esseri umani12. Tuttavia, poiché i neuroni periferici di grandi dimensioni e mielinizzati contribuiscono in modo sproporzionato all’ampiezza del potenziale d’azione del composto sensoriale, il monitoraggio della soglia elettrica dell’intero nervo non consente la valutazione della funzione delle fibre C11,13. Infatti, in uno studio precedente, il monitoraggio della soglia elettrica del nervo intero nelle coorti di dolore neuropatico cronico con neuropatia diabetica e polineuropatia indotta da chemioterapia non ha mostrato differenze nell’eccitabilità assonale11.
In uno studio precedente, il tracciamento della soglia elettrica a livello di singolo neurone è stato utilizzato per esaminare l’eccitabilità dei nocicettori delle fibre C durante le registrazioni delle fibre prese in giro in una preparazione di nervo cutaneo di ratto ex vivo 14. Gli autori hanno dimostrato che una maggiore concentrazione di potassio, condizioni acide e bradichinina hanno aumentato l’eccitabilità dei nocicettori delle fibre C, come riflesso da una soglia elettrica ridotta per la generazione del potenziale d’azione. Inoltre, il riscaldamento del campo ricettivo dei nocicettori sensibili al calore ha ridotto la loro soglia elettrica, mentre i nocicettori insensibili al calore hanno mostrato un aumento della loro soglia elettrica14. Ciò fornisce un’importante prova che il tracciamento della soglia elettrica a singolo neurone è possibile e può essere utile, ma attualmente non ci sono soluzioni software e / o hardware disponibili per consentire tali indagini, in particolare per gli studi sull’uomo.
Nell’uomo, la microneurografia è l’unico metodo disponibile per valutare direttamente le proprietà elettrofisiologiche delle fibre C15. Questo approccio è stato utilizzato per dimostrare la disfunzione dei nocicettori in pazienti con dolore cronico 2,3,4,5,6,7. La microneurografia può rilevare potenziali d’azione di un singolo neurone; tuttavia, a causa dei bassi rapporti segnale-rumore, i ricercatori utilizzano la tecnica di marcatura per caratterizzare l’attività delle fibre C16. Nella tecnica di marcatura, la stimolazione elettrica soprasoglia viene applicata ai campi ricettivi della fibra C nella pelle. Questa stimolazione elettrica genera un potenziale d’azione che si verifica a una latenza costante, determinata dalla velocità di conduzione della fibra C. Le fibre C mostrano un rallentamento dipendente dall’attività, per cui la loro velocità di conduzione si riduce e, quindi, la loro latenza di conduzione aumenta durante i periodi di scarica potenziale d’azione17. In condizioni basali, le fibre C normalmente non generano potenziali d’azione in assenza di stimoli nocivi e, pertanto, la loro latenza di conduzione in risposta alla stimolazione elettrica a bassa frequenza è costante. Gli stimoli meccanici, termici o farmacologici, che evocano l’accensione, inducono un rallentamento dipendente dall’attività, che aumenta la latenza dei potenziali d’azione evocati dalla concomitante stimolazione elettrica a bassa frequenza. Ciò consente l’identificazione oggettiva delle risposte agli stimoli non elettrici applicati nel contesto di un basso rapporto segnale-rumore. Pertanto, il rallentamento dipendente dall’attività può essere utilizzato per caratterizzare funzionalmente le fibre C16. In effetti, diverse classi funzionali di fibre C mostrano modelli distintivi di rallentamento dipendente dall’attività nei paradigmi di stimolazione elettrica che comportano la variazione della frequenza di stimolazione18,19. Questa variabilità nella latenza dei potenziali d’azione delle fibre C rappresenta una sfida per gli algoritmi progettati per monitorarli.
L’attività continua in un nocicettore porta ad una maggiore variabilità nella sua latenza durante la stimolazione elettrica a bassa frequenza, e questo è di nuovo dovuto al rallentamento dipendente dall’attività. Questa maggiore variabilità, o jitter, è una misura proxy quantificabile dell’eccitabilità2. Ulteriori cause di variabilità nella latenza del potenziale d’azione includono il flip-flop, in cui vengono stimolati rami terminali alternativi di un singolo neurone, che fa sì che il potenziale d’azione evocato abbia due (o più) latenze basali che si escludono a vicenda20. Infine, i cambiamenti nella temperatura dei rami terminali di un neurone periferico causano anche cambiamenti di latenza del potenziale d’azione in modo termodinamico, con il riscaldamento che aumenta la velocità di conduzione e il raffreddamento rallenta la velocità di conduzione19. Pertanto, qualsiasi software che cerchi di eseguire il tracciamento della soglia elettrica a circuito chiuso delle fibre C nocicettive deve consentire cambiamenti nella latenza nei potenziali d’azione evocati elettricamente.
Per raggiungere il nostro obiettivo di tracciamento della soglia elettrica cross-specie dei nocicettori in fibra C, abbiamo sviluppato APTrack, un plug-in software open source per la piattaforma Open Ephys21, per consentire il monitoraggio della soglia elettrica in tempo reale, a circuito chiuso, e il monitoraggio della latenza. Forniamo dati proof-of-concept che dimostrano che è possibile il tracciamento della soglia elettrica dei nocicettori in fibra C durante la microneurografia umana. Inoltre, dimostriamo che questo strumento può essere utilizzato nell’elettrofisiologia delle fibre stuzzicate ex vivo dei roditori, consentendo così studi traslazionali tra esseri umani e roditori. Qui, descriveremo in dettaglio come i ricercatori possono implementare e utilizzare questo strumento per aiutare il loro studio della funzione e dell’eccitabilità dei nocicettori.
Protocol
Representative Results
Discussion
APTrack è un plugin software da utilizzare con la piattaforma Open Ephys. Abbiamo scelto questa piattaforma in quanto è open-source, flessibile ed economica da implementare. Escludendo il costo dello stimolatore a corrente costante, tutte le attrezzature necessarie per iniziare a utilizzare il plugin potrebbero essere acquistate per circa $ 5.000 USD al momento della scrittura. Speriamo che ciò consentirà ai ricercatori di implementare APTrack nei loro studi di elettrofisiologia dei nervi periferici più facilmente. Inoltre, i ricercatori possono modificare liberamente il software per soddisfare le loro esigenze sperimentali. È importante sottolineare che questo strumento ha permesso il tracciamento della soglia elettrica di singoli nocicettori in fibra C, per la prima volta, negli esseri umani.
Maggiore è il rapporto segnale-rumore, meglio gli algoritmi possono identificare i potenziali d’azione. Il rapporto segnale-rumore durante la microneurografia era sufficiente nella maggior parte delle nostre registrazioni, ma gli utenti devono essere attenti al rischio di degradazione del segnale nel tempo. Ciò è particolarmente importante per protocolli sperimentali più lunghi, perché se l’ampiezza del potenziale d’azione tracciato scende al di sotto della soglia di rilevamento, l’ampiezza della stimolazione verrà aumentata erroneamente; Questo può essere mitigato dagli sperimentatori che monitorano il plugin e quindi regolano le impostazioni, se necessario. Il rapporto segnale/rumore è migliorato con il filtraggio passa banda, ma i transienti più grandi possono ancora essere identificati erroneamente come potenziali d’azione se dovessero arrivare durante la finestra temporale della casella di ricerca. Il rischio di identificare erroneamente il rumore transitorio come potenziale d’azione può essere ridotto restringendo la finestra temporale durante la quale il plugin cerca i potenziali d’azione e ottimizzando le impostazioni di soglia. Tuttavia, ci sono ancora situazioni che si possono incontrare che impediscono le prestazioni del plugin. L’attività spontanea può causare difficoltà se i potenziali d’azione di ampiezza maggiore rientrano nella finestra della casella di ricerca dell’algoritmo, poiché verranno erroneamente identificati come potenziali d’azione target. Inoltre, l’attività spontanea nel neurone di interesse può significare che la stimolazione elettrica cade durante il suo periodo refrattario, causando l’incapacità di generare un potenziale d’azione. Le difficoltà nell’uso del software possono anche sorgere quando i neuroni afferenti primari mostrano flip-flop, per cui vengono stimolati rami terminali alternativi di un singolo neurone, facendo così sì che il potenziale d’azione evocato abbia due (o più) latenze basali che si escludono a vicenda20. Durante le registrazioni da neuroni che mostrano flip-flop con alti rapporti segnale-rumore, abbiamo eseguito con successo il tracciamento della latenza e della soglia elettrica aumentando la larghezza della casella di ricerca per incapsulare tutte le potenziali velocità di conduzione esibite dal neurone. Tuttavia, la soglia elettrica può variare a seconda del ramo terminale del neurone che viene eccitato, il che è probabilmente in parte dovuto alle differenze nella distanza dal sito della stimolazione elettrica ai terminali nocicettori alternativi. È possibile un ulteriore lavoro sul processo di identificazione del potenziale d’azione per includere, ad esempio, la corrispondenza dei modelli e potrebbe essere integrato in questo software. I plugin GUI per il band-stop o la filtrazione adattiva del rumore potrebbero anche essere utilizzati a monte di APTrack nella catena del segnale se dovessero essere sviluppati.
Consideriamo la soglia elettrica determinata come la corrente richiesta per suscitare un potenziale d’azione il 50% del tempo, su un numero definito dall’utente di stimoli elettrici, tipicamente 2-10. La morfologia della stimolazione elettrica è di 0,5 ms e impulsi positivi a onda quadra. Questo non è lo stesso che determinare la reobase, una misura comunemente usata di eccitabilità neuronale. Il plugin potrebbe essere adattato per determinare la reobase. Tuttavia, abbiamo perseguito una misura più semplice, poiché i cambiamenti dinamici nell’eccitabilità, come quelli ipotizzati durante il riscaldamento, sarebbero stati più difficili da quantificare con i cambiamenti della reobase rispetto alla nostra stima della soglia elettrica.
Questo software può essere utilizzato in esperimenti sia umani che di roditori. Ciò è reso possibile dal supporto flessibile per i sistemi di stimolazione elettrica. Il software funzionerà con qualsiasi stimolatore che accetta una tensione di comando analogica o può essere interfacciato manualmente con un motore passo-passo. Per la microneurografia, lo abbiamo usato con uno stimolatore a corrente costante marcato CE che è stato progettato per l’uso nella ricerca umana e aveva la sua stimolazione controllata da un quadrante. Gli stimolatori che accettano comandi di tensione analogici possono essere rumorosi in quanto non scollegano il circuito tra gli stimoli, il che significa che qualsiasi ronzio o rumore a 50/60 Hz sull’ingresso analogico verrà trasmesso alla registrazione. Uno stimolatore che richiede un segnale di trigger TLL aggiuntivo per collegare il circuito, consentendo di generare uno stimolo a una corrente analoga all’ingresso di tensione analogico, è ideale per l’uso con il plugin. Ciò impedisce che il rumore venga trasmesso alla registrazione tra gli stimoli.
Il software utilizza un semplice metodo up-down per stimare la soglia elettrica. Questo è stato usato nei test di psicofisica per molti decenni25. In linea con il metodo up-down, l’algoritmo di tracciamento della soglia elettrica per modulare l’ampiezza della stimolazione considera solo l’ampiezza e la risposta della stimolazione precedente quando si calcola l’ampiezza della stimolazione successiva. Ciò significa che l’ampiezza della stimolazione oscillerà attorno alla vera soglia elettrica, producendo così una velocità di accensione del 50%, supponendo che la soglia sia stabile. La dimensione minima di un incremento o decremento è 0,01 V; ciò equivale a 0,01 mA supponendo che lo stimolatore abbia un rapporto ingresso-uscita di 1 V:1 mA e una risoluzione sufficiente per ottenere cambiamenti di passo così piccoli. Il plugin aggiornerà la stima in tempo reale della soglia elettrica del potenziale d’azione target ogni volta che raggiunge una velocità di attivazione del 50% su un numero definito dall’utente di stimoli precedenti (2-10). Post hoc, raccomandiamo di utilizzare una media mobile dell’ampiezza della stimolazione negli ultimi 2-10 stimoli per stimare la soglia elettrica, e va notato che questa stima sarà accurata solo quando la velocità di accensione è relativamente stabile al 50%. Sia nelle stime live che post hoc della soglia elettrica, c’è un equilibrio tra risoluzione, affidabilità e tempo da considerare. L’utilizzo di piccoli passi di incremento e decremento aumenterà l’accuratezza della stima della soglia elettrica, ma aumenterà il tempo necessario per trovare la nuova soglia elettrica inizialmente e dopo la perturbazione. Il calcolo della soglia elettrica su un numero maggiore di stimoli precedenti fornirà una migliore affidabilità ma aumenterà il tempo necessario per raggiungere una stima accurata.
APTrack è stato progettato per l’uso nelle registrazioni dei nervi periferici, in particolare per tracciare le soglie elettriche delle fibre C durante perturbazioni sperimentali e patologiche in periodi in cui la latenza potenziale d’azione può variare a seconda dell’attività neuronale sottostante. Questo metodo consentirà l’esame non solo dell’eccitabilità assonale, ma anche dei potenziali generatori di nocicettori in volontari e pazienti sani. Prevediamo che altri campi dell’elettrofisiologia possano adottare e adattare questo strumento per l’uso in qualsiasi esperimento che richieda il monitoraggio della soglia elettrica di un’attività bloccata dallo stimolo. Ad esempio, questo potrebbe essere facilmente adattato per la stimolazione optogenetica con impulsi luminosi guidati da APTrack. Il plugin è open-source e disponibile per i ricercatori sotto licenza GPLv3. È costruito sulla piattaforma Open Ephys, che è un sistema di acquisizione dati adattabile, a basso costo e open source. Il plugin fornisce hook aggiuntivi per i plugin a valle per estrarre le informazioni sul potenziale d’azione e fornire interfacce utente aggiuntive o paradigmi adattivi. Il plugin fornisce una semplice interfaccia utente per la visualizzazione e il monitoraggio della latenza dei potenziali d’azione in tempo reale. Può anche riprodurre i dati precedenti e visualizzarli utilizzando il grafico raster temporale. Inoltre, può anche eseguire il monitoraggio della latenza durante la riproduzione di dati precedenti. Mentre ci sono altri pacchetti software disponibili per il monitoraggio della latenza in tempo reale, non sono open-source e non possono eseguire il tracciamento della soglia elettrica26,27. APTrack ha un vantaggio rispetto ai metodi tradizionali di identificazione dei potenziali d’azione a latenza costante dalle tracce di tensione in quanto utilizza un grafico raster temporale per la visualizzazione dei dati. Inoltre, le nostre esperienze di utilizzo in esperimenti con bassi rapporti segnale-rumore hanno indicato che il metodo di visualizzazione del grafico raster temporale consente l’identificazione di potenziali d’azione a latenza costante che altrimenti sarebbero stati persi.
Il monitoraggio della soglia del nervo intero è un metodo ampiamente utilizzato per valutare l’eccitabilità assonale13. Il tracciamento della soglia elettrica del singolo neurone nelle fibre C dei roditori è stato utilizzato in precedenza per quantificare l’eccitabilità dei nocicettori14 e la sua utilità nell’uomo è riconosciuta10,11; Tuttavia, fino ad ora, questo non era possibile. Forniamo un nuovo strumento open source per misurare direttamente l’eccitabilità dei singoli nocicettori negli studi elettrofisiologici sui roditori e sui nervi periferici umani. APTrack consente per la prima volta il monitoraggio in tempo reale, open-source, della soglia elettrica dei potenziali d’azione dei singoli neuroni negli esseri umani. Prevediamo che faciliterà gli studi traslazionali dei nocicettori tra roditori e umani.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vorremmo ringraziare i nostri finanziatori per il loro sostegno: Academy of Medical Sciences (J.P.D., A.E.P.), Versus Arthritis (J.P.D., A.E.P.), Jean Golding Institute Seedcorn Grant (J.P.D., A.E.P., G.W., A.C.S., M.M.P.) e Biotechnology and Biological Sciences Research Council partnership partnership doctorship con Eli Lilly (G.W.T.N.). Vorremmo estendere i nostri ringraziamenti a tutti coloro che hanno contribuito allo sviluppo di APTrack. Vorremmo anche ringraziare i nostri volontari che hanno partecipato agli esperimenti di microneurografia e i nostri collaboratori di coinvolgimento e coinvolgimento dei pazienti e del pubblico per il loro inestimabile contributo.
Materials
| 12V DC Power Supply | NA | NA | To power uStepper S-lite. Required for dial-controlled stimulators. |
| 36 Pin Electrode Adapter Board | Intan Technology | C3410 | APTrack Dependency. For connecting electrode input to headstage. $255 USD as of March 2021. |
| APTrack Plugin | NA | NA | https://github.com/Microneurography/APTrack |
| Bipolar Ag/AgCl Recording Electrode | Custom | NA | Recording electrode for the skin-nerve preparation. Or equivalent. |
| Bipolar Concentric Stimulating Electrode | World Precision Instruments | SNE-100 | For electrical stimulation in the mouse skin-nerve preparation. Or equivalent. |
| Bipolar Transcutaneous Stimulating Electrode | Custom | NA | For transcutaneous electrical stimulation while searching for single-neuron action potentials during microneurography. |
| BNC T Splitter (1+) | NA | NA | APTrack Dependency. Any standard BNC T splitter. |
| BNC to BNC cables (3+) | NA | NA | APTrack Dependency. Any standard BNC cables. |
| C6H11NaO7 | Merck | S2054 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| CaCl2 | Merck | C5670 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| Digitimer DS4 Constant Current Stimulator | Digitimer | DS4 | Constant current stiulator for animal research. £1,695 GBP as of September 2022. |
| Digitimer DS7 Constant Current Stimulator | Digitimer | DS7A | Constant current stiulator for human research. £3,400 GBP as of September 2022. |
| Electroaccupuncture Classic Plus Stimulating Electrodes | Harmony Medical | NA | For fixed position intradermal electrical stimulation of the dorsal aspect of the foot during human microneurography. |
| Glucose | Fisher Scientific | G/0450/60 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| HDMI Cable | NA | NA | APTrack Dependency. Any standard passive HMDI cable. To connect OE I/O Board to OE Acquisition Board. |
| KCl | Merck | P9541 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| MgSO4 | Acros Organics | 213115000 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| Mineral Oil | Merck | 330779 | Electrical insulation for nerve recordings in th skin-nerve preparation. Or equivalent. |
| NaCl | Merck | S9888 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| NaHCO3 | Merck | S6014 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| NaHCO3 | Merck | S0751 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| Open Ephys Acquisition Board | Open Ephys | NA | APTrack Dependency. Includes USB cable to connect to computer and mains socket power supply. €2,955 EUR as of September 2022. |
| Open Ephys Graphical User Interface | Open Ephys | NA | https://github.com/open-ephys/plugin-GUI |
| Open Ephys I/O Board | Open Ephys | NA | APTrack Dependency. For ADC voltage inputs via BNC cables. €12.5 EUR without connectors, €85 EUR with connectors as of September 2022. |
| PulsePal V2 | Sanworks | 1102 | APTrack Dependency. Open-source DAC and train generator. $725 USD pre-assembled as of September 2022. Approx. $275 USD for self-assembly. |
| RHD 6ft SPI Cable | Intan Technology | C3206 | APTrack Dependency. For connecting headstage to OE Acquisition Board. $295 USD as of March 2021 |
| RHD2216 16ch Bipolar Headstage | Intan Technology | C3313 | APTrack Dependency. For data acquisition and digitization. $725 USD as of March 2021. Or equivalent RHD2000 series headstage. |
| Sucrose | Fisher Scientific | S/8560/60 | Skin-nerve preparation synthetic interstitial fluid constituent. Or equivalent. |
| TCS-II Thermal Stimulator | QST.Lab | NA | For thermal stimualtion of nociceptor receptive fields during human microneurography. |
| Tungsten Microelectrode Pair (Active + Reference) | FHC | 30085 | For microneurography recordings. 35mm. |
| Ultrasound Scanner iQ+ | Butterfly Network | NA | For ultrasound-guided electrode insertion during microneurography. |
| USB 3.0 5kV RMS Isolation | Inota Technology | 7055-D | For isolating human microneuroography participant from computer. €459 EUR as of September 2022. |
| USB-A to micro USB-B cable (2) | NA | NA | APTrack Dependency. To connect computer to PulsePal and to uStepper S-lite if using stepper-stimulator interfacing. |
| uStepper S-lite + NEMA17 motor | uStepper | NA | To interface with stimulators via a control dial. €50 EUR as of September 2022. |
| Von Frey Filaments | Ugo Basile | 37450-275 | For mechanical stimulation of receptive fields during sensory phenotyping of nociceptors. |
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