Um pipeline padronizado é apresentado para examinar a morfometria de matéria cinzenta de cerebelo. O pipeline combina abordagens de alta resolução e última geração para parcelamento otimizado e automatizado de cerebelo e registro baseado em voxel do cerebelo para quantificação volumosa.
Várias linhas de pesquisa fornecem evidências convincentes para um papel do cerebelo em uma ampla gama de funções cognitivas e afetivas, indo muito além de sua associação histórica com o controle motor. Estudos estruturais e funcionais de neuroimagem têm refinado ainda mais a compreensão da neuronatomia funcional do cerebelo além de suas divisões anatômicas, destacando a necessidade de exame de subunidades cerebelares individuais em variabilidade saudável e doenças neurológicas. Este artigo apresenta um pipeline padronizado para examinar a morfometria de matéria cinzenta de cerebelo que combina abordagens de alta resolução e última geração para parcelação otimizada e automatizada de cerebelo (Parcelamento Anatômico Automático de Cerebelo usando otimização localmente restrita da U-Net; ACAPULCO) e registro baseado em voxel do cerebelo (Modelo Infra-tentorial Espacialmente Imparcial; TERNO) para quantificação volumosa.
O gasoduto possui ampla aplicabilidade a uma gama de doenças neurológicas e é totalmente automatizado, com intervenção manual necessária apenas para o controle de qualidade das saídas. O pipeline está livremente disponível, com documentação substancial, e pode ser executado em sistemas operacionais Mac, Windows e Linux. O gasoduto é aplicado em uma coorte de indivíduos com ataxia friedreich (FRDA), e são fornecidas recomendações sobre análises estatísticas inferenciais em nível de grupo. Este gasoduto poderia facilitar a confiabilidade e a reprodutibilidade em todo o campo, fornecendo, em última análise, uma abordagem metodológica poderosa para caracterizar e rastrear mudanças estruturais cerebelares em doenças neurológicas.
O cerebelo é uma parte do cérebro historicamente associada ao controle motor 1,2,3 e acredita-se estar integralmente envolvido em apenas um pequeno conjunto de doenças raras, como ataxiasherdadas 4. No entanto, linhas convergentes de pesquisas de estudos de rastreamento anatômicos em primatas não humanos, bem como estudos de lesão humana e neuroimagem, fornecem evidências convincentes para um papel do cerebelo em uma ampla gama de 5,6,7 cognitivos, afetivos 8,9,10,11, e outras funções não motoras 7,12 (ver6 para revisão). Além disso, anormalidades do cerebelo estão cada vez mais implicadas em uma ampla gama de distúrbios neurológicos e psiquiátricos, incluindo doença de Parkinson13, doença de Alzheimer14,15, epilepsia16,17, esquizofrenia18 e transtorno do espectro autista19 . Por isso, tornou-se essencial incorporar o cerebelo em modelos funcionais e estruturais de doenças cerebrais humanas e variabilidade comportamental normativa.
Anatomicamente, o cerebelo pode ser dividido ao longo de seu eixo superior ao inferior em três lóbulos: anterior, posterior e flocculonodular. Os lobos são ainda subdivididos em 10 lobulas denotadas pelos numerais romanos I-X20,21 (Figura 1). O cerebelo também pode ser agrupado em zonas de linha média (vermis) e laterais (hemisfério), que respectivamente recebem entradas da medula espinhal e córtex cerebral. O lobo anterior, composto por lobules I-V, tem sido tradicionalmente associado a processos motores e tem conexões recíprocas com cortices motoras cerebrais22. O lobo posterior, composto por lobules VI-IX, está principalmente associado aos processos não motor11 e possui conexões recíprocas com o córtex pré-frontal, parietal posterior e cortices cerebrais temporais superiores 8,23. Por fim, o lobo flocculonodular, composto por lobule X, possui conexões recíprocas com núcleos vestibulares que regem os movimentos oculares e o equilíbrio corporal durante a postura e a marcha21.
Um corpo crescente de trabalhos recentes usando neuroimagem funcional tem ainda mais refinado a compreensão da neuronatomia funcional do cerebelo além de suas divisões anatômicas. Por exemplo, técnicas de ressonância magnética funcional (fMRI) de estado de repouso têm sido usadas para mapear o padrão de interações funcionais entre o cerebelo e o cerebrum24. Além disso, usando uma abordagem de parcelamento baseada em tarefas, King e seus colegas7 demonstraram que o cerebelo mostra um rico e complexo padrão de especialização funcional em toda a sua amplitude, evidenciado por diferentes limites funcionais associados a uma variedade de tarefas motoras, afetivas, sociais e cognitivas. Coletivamente, esses estudos destacam a importância de examinar subunidades cerebelares individuais para desenvolver caracterizações biológicas completas do envolvimento do cerebelo tanto na variabilidade saudável quanto nas doenças neurológicas caracterizadas por alterações na estrutura e/ou função cerebelar.
O presente trabalho se concentra em métodos para quantificar mudanças locais no volume cerebelar utilizando ressonância magnética estrutural em humanos. Em geral, existem duas abordagens fundamentais para a quantificação do volume cerebral regional usando dados de ressonância magnética: segmentação baseada em recursos e registro baseado em voxel. As abordagens de segmentação baseadas em recursos usam marcos anatômicos e atlas padronizados para identificar automaticamente limites entre sub-regiões. Os principais pacotes de software para segmentação incluem FreeSurfer25, BrainSuite26 e FSL-FIRST27. No entanto, esses pacotes fornecem apenas parcelas grosseiras do cerebelo (por exemplo, rotulando toda a matéria cinzenta e toda a matéria branca em cada hemisfério), ignorando assim os lobulos cerebelares individuais. Essas abordagens também são propensas à má segmentação, particularmente a superaclusão da vasculatura circundante.
Novos algoritmos de rotulagem de aprendizado de máquina e multi-atlas foram desenvolvidos, que fornecem parcelação mais precisa e mais fina do cerebelo, incluindo classificação automática do algoritmo de lobules cerebelar usando evolução implícita multi-fronteira (ACCLAIM28,29), Kit de Ferramentas de Análise Cerebelar (CATK30), Múltiplos Modelos Gerados Automaticamente (MAGeT31), Segmentação automática rápida do cerebelo humano e seus lobules (RASCAL32 ), segmentação de corte gráfico33 e Segmentação cerebellum (CERES34). Em um artigo recente comparando abordagens de parcelamento de cerebelo totalmente automatizados, o CERES2 superou outras abordagens relativas à segmentação manual padrão-ouro dos lobulos cerebelares35. Mais recentemente, Han e seus colegas36 desenvolveram um algoritmo de aprendizagem profunda chamado ACAPULCO (Automatic Cerebellum Anatomical Parcellation using U-Net com otimização localmente restrita), que funciona em comparação com o CERES2, tem ampla aplicabilidade para cerebelos saudáveis e atrofiados, está disponível em formato de contêiner Docker e Singularity de código aberto para implementação ‘off-the-shelf’, e é mais eficiente do que outras abordagens. A ACAPULCO parcela automaticamente o cerebelo em 28 regiões anatômicas.
Em contraste com a segmentação baseada em recursos, as abordagens de registro baseadas em voxel operam mapeando precisamente uma ressonância magnética para uma imagem de modelo. Para alcançar esse mapeamento, os voxels na imagem original devem ser distorcidos em tamanho e forma. A magnitude dessa distorção fornece efetivamente uma medida de volume em cada voxel em relação ao modelo padrão-ouro. Esta forma de avaliação volumosa é conhecida como “morfometria baseada em voxel”37. Abordagens de registro baseadas em voxel de cérebro inteiro, como FSL-FLIRT38/FNIRT39, segmentação unificada SPM40 e CAT1241, são comumente usadas para morfometria baseada em voxel. No entanto, essas abordagens não explicam bem o cerebelo, resultando em baixa confiabilidade e validade em regiões infratentoriais (cerebelo, troncocerebral 42). Para explicar essas limitações, o algoritmo SUIT (Spatially Unbiased Infra-tentorial Template) foi desenvolvido para otimizar o registro de cerebelo e melhorar a precisão da morfometriabaseada em voxel 42,43.
As abordagens de segmentação baseadas em recursos e de registro baseadas em voxel para a estimativa do volume cerebelar regional têm pontos fortes e fracos fundamentais. As abordagens de segmentação são substancialmente mais precisas para quantificar o volume de áreas anatomicamente definidas (por exemplo, lobulos35). No entanto, os limites entre módulos funcionais distintos do cerebelo não mapeiam em suas folias anatômicas e fissuras (equivalentes a gyri e sulci do cerebrum7). Como as abordagens baseadas no registro não são restritas por marcos anatômicos, é possível44 inferência espacial de grãos finos e mapeamento de alta função de estrutura dimensional do cerebelo. Em conjunto, as abordagens de segmentação e registro são complementares entre si e podem ser utilizadas para responder a diferentes questões de pesquisa.
Aqui, é apresentado um novo pipeline padronizado, que integra essas abordagens existentes e validadas para fornecer parcelamento otimizado e automatizado (ACAPULCO) e registro baseado em voxel do cerebelo (SUIT) para quantificação volumosa (Figura 2). O pipeline baseia-se nas abordagens estabelecidas para incluir protocolos de controle de qualidade, utilizando visualização qualitativa e detecção quantitativa de outlier, e um método rápido para obter uma estimativa de volume intracraniano (ICV) usando Freesurfer. O pipeline é totalmente automatizado, com intervenção manual necessária apenas para verificar as saídas de controle de qualidade, e pode ser executado em sistemas operacionais Mac, Windows e Linux. O gasoduto está livremente disponível sem restrições de seu uso para fins não comerciais e pode ser acessado a partir da página web do ENIGMA Consortium Imaging Protocols (sob “ENIGMA Cerebellum Volumetrics Pipeline”), após a conclusão de um breve formulário de registro45.
Todos os softwares necessários estão listados na Tabela de Materiais, e tutoriais detalhados, incluindo uma demonstração ao vivo, estão disponíveis no download do pipeline, além do protocolo descrito abaixo. Finalmente, são fornecidos resultados representativos, a partir da implementação do gasoduto em uma coorte de pessoas com ataxia friedreich (FRDA) e controles saudáveis compatíveis com idade e sexo, juntamente com recomendações para análises estatísticas inferenciais de nível de grupo.
O cerebelo é fundamental para uma ampla gama de funçõesmotoras 3,cognitivas 58,afetivas 10 elinguagem 7,59 e está implicado em muitas doenças neurológicas e psiquiátricas. A disponibilidade de uma abordagem padronizada e facilmente implementável para a quantificação dos volumes cerebelares regionais contribuirá para um mapeamento estrutura-função estruturais cada vez mais detalha…
The authors have nothing to disclose.
O trabalho apresentado neste manuscrito foi financiado por um Subsídio de Ideias do Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica australiana (NHMRC): APP1184403.
ACAPULCO pipeline files | 0.2.1 | http://enigma.ini.usc.edu/protocols/imaging-protocols/ | Please make sure to use acapulco version 0.2.1 |
Docker for Mac | https://docs.docker.com/desktop/mac/install/ | macOS must be version 10.14 or newer Docker requires sudo priviledges Docker imposes a memory (RAM) constraint on Mac OS. To increase the RAM, open Docker Desktop, go to Preferences and click on resources. Increase the Memory to the maximum |
|
Docker for Windows | https://docs.docker.com/docker-for-windows/install/ | ||
ENIGMA SUIT scripts | http://enigma.ini.usc.edu/protocols/imaging-protocols/ | ||
FreeSurfer | 7 | https://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/DownloadAndInstall | Following variables need to be set everytime you work with Freesurfer: export FREESURFER_HOME=freesurfer _installation_directory source $FREESURFER_HOME/SetUpFreeSurfer.sh |
export SUBJECTS_DIR=path/enigma/Freesurfer | |||
FSL (for FSLeyes). Optional | 6 | https://fsl.fmrib.ox.ac.uk/fsl/fslwiki/FslInstallation | |
ICV pipeline files | http://enigma.ini.usc.edu/protocols/imaging-protocols/ | ICV pipeline can be run in two ways: 1) with docker/singularity. You will not require additionl software; 2) without docker/singularity- this involves running the ICV script (calculate_icv.py) manually. You will require the following additional software: Python version =3.5 Python module pandas Python module fire Python module tabulate Python module Colorama |
|
https://github.com/Characterisation-Virtual-Laboratory/calculate_icv | |||
MATLAB* | 2019 or newer | https://au.mathworks.com/ | An academic license is required |
Singularity | 3.7 or newer | https://www.sylabs.io/docs/ | Prefered for high performance computing (HPC) clusters |
SPM | 12 | http://www.fil.ion.ucl.ac.uk/spm/software/spm12/ | Make sure spm12 and all subfolders are in your MATLAB path |
SUIT Toolbox | 3.4 | http://www.diedrichsenlab.org/imaging/suit_download.htm | Make sure you place SUIT toolbox in spm12/toolbox directory |
Troubleshooting manual and segmentation output examples | http://enigma.ini.usc.edu/protocols/imaging-protocols/ | ||
Tutorial manual and video | http://enigma.ini.usc.edu/protocols/imaging-protocols/ | Manual and accompanying live demonstration provide detailed step-by-step instructions on how to run the pipeline from start to finish. | |
*Not freely available; an academic license is required |