Willis Fare Çemberi Ayırma Protokolü
Summary
We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.
Abstract
Willis (inek) serebral arter daire (circulus arteriosus serebri) ya da daire beyin ve çevreleyen yapılara kan tedarik optik chiasma ve hipotalamus çevreleyen bir dolaşım anastomoz olduğunu. Bu serebral amiloid anjiyopati (CAA) -associated damar hastalığı intrakraniyal ateroskleroz ve intrakranyal anevrizma dahil olmak üzere birçok serebrovasküler bozukluklar, implike edilmiştir. onların önlenmesi için yeni ilaç hedeflerinin tanımlanması için bu hastalıkların altında yatan moleküler mekanizmaların Çalışmaları hayvan modelleri gerektirmektedir. Diğerleri burada açıklanan CoW.The yöntemiyle herhangi bir fare soyu inek izolasyonu için uygundur ve (genlerin protein üretiminin ifadesini taranması için önemli bir potansiyele sahiptir dahil serebro-damar sisteminin izolasyonu, içerecektir ise bu modellerin bazıları, transgenik olabilir posttranslasyonel protein modifikasyonları, vb secretome analiz) fare serebrovasküler büyük gemilerde çalışmalarıdamar. Aynı zamanda, izole edilmiş fare olfaktori arter için geliştirilmiş organ banyosu uyarlama sisteminin ile ex vivo çalışmalar için de kullanılabilir.
Introduction
Ayrıca Willis (inek), Willisor Willis çokgenin döngünün daire olarak bilinen serebral arter daire (circulus arteriosus serebri),) ilk Bu optik chiasma ve can hipotalamus çevresinde bulunan bir dolaşım anastomoz olan 1664 yılında Thomas Willis tarafından tanımlanmıştır Beyin ve çevre yapılara kan tedarik merkezi bir hub olarak düşünülebilir. Kan internal karotis ve vertebral arterler ile bu yapıyı girer ve iç orta ve posterior serebral arterlerin vasıtasıyla çemberin dışına akar. Bu arterlerin her dairenin her iki tarafında dalları sol ve sağ etti. Tam bir daire arterler iletişim baziler sonrası haberleşme, ve anterior (Şekil 1 ve Şekil 2). çıkış arterlerin herhangi kan akım riski bu şekilde yeterli kan B beslenir garanti, karotis ve serebral arter bir çevre giren kan birleşmesi ile en aza indirilmiştiryağmur. Bu yapı aynı zamanda internal karotis arter şiddetli tıkayıcı hastalıklarda kollateral kan akımı için ana yol olarak hizmet vermektedir.
serebrovasküler hastalıkların birkaç çeşit inek kökenlerine sahip. En yaygın 1, 2, 3 Bu bozukluklar nedeniyle vazodilatasyon hipoperfüzyona yol açabilir. Serebral amiloid anjiyopati (CAA) -associated damar hastalığı, intrakranial ateroskleroz ve intrakranial anevrizmalar, ve intraserebral ve / veya subaraknoid kanama sonuçta iskemik veya hemorajik inme veya çevrilmesine en iyi ihtimalle, bir geçici iskemik atak. muhtemelen anjiyografi ile kombine beyin görüntüleme dahil olmak üzere tanı yöntemleri, son gelişmeler, bir beyin biyopsisi için gerek kalmadan, mümkün klinik bu büyük serebrovasküler hastalıklar teşhis etmek için yaptık. Bununla birlikte, etkili ve spesifik tedavi (farmakolojik veya endovasküler) henüz mevcut değildir ve yeni tanımlamak için bir ihtiyacı vardırmoleküler hedefler.
İnsanlarda bu hastalıkların önlenmesi için yeni ilaç hedefleri belirlenmesi hayvan modelleri ve inek de dahil olmak üzere serebro-damarsal izole yollarını gerektirir. Bu tür modeller intrakranial arter anevrizması, CAA veya intrakranial aterosklerozun hayvan modellerinde büyük damarların duvarlarında meydana gelen iltihabi değişiklikler de dahil belirli değişikliklere kanıt ve ipuçlarını vermelidir. 4, 5, 6
Böyle CAA Alzheimer hastalığı damar iltihabı üzerinde (AD) ve ilişkili hastalıklar, kolaylaştırmak için, fare, inek izolasyonu için bir yöntem oluşturmuştur. Fare COW izole edilmesi için bu yöntem, hastalığın ilerlemesi sırasında enflamatuar serebrovasküler gen ekspresyonunun değerlendirilmesi için geliştirilmiştir. Birlikte Leptomeningeal ve Pial arter duvarları içinde amiloit beta birikmesi saptanması ile, bu yöntem, daha kolay caydırmak için yapabilirizmayın inflamatuar serebro-damar duvarında gen ifadesinde ve Aβ-peptid birikimi arasındaki olası ilişki. subaraknoid mesafede leptomeningeal ve Pial dahil beyin, damar ağı, Willis çemberi oluşturan büyük arterlerin bir uzantısıdır. Burada tarif edilen yöntem, herhangi bir fare soyu inek izole etmek için kullanılabilir ve fare beyin-damar sisteminin büyük gemiler üzerinde tarama (örneğin, gen ekspresyonu, protein üretimi ve translasyon sonrası protein modifikasyonları) her türlü kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Biz Willis poligonunun izolasyonu için burada bir tekrarlanabilir protokol açıklar. İNEK ilgili sık serebrovasküler hastalıklar arteriyel damarlarının duvarlarını etkileyen her hangi SAA ilişkili vaskulopatiler, intrakranial ateroskleroz ve intrakranial anevrizma vardır. risk faktörleri iyi bilinmektedir, ancak bu serebral bozuklukların moleküler patogenezi henüz tam olarak anlaşılamamış ve bunların oluşumunun tahmin etmek için belirli biyolojik belirteçler eksiktir. moleküler değişiklikler i…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser Paris VI Üniversitesi ve Pierre Fabre Yenilik hibe ile desteklenmiştir.
Materials
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Hardened Fine Iris Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Scissors – Straight / Sharp / Sharp 16.5 cm | Fine Science Tools | 14002-16 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Stereoscopic Zoom Microscope | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60mm Culture Dish | Corning | #3295 | |
| Peristaltic Pump – MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
References
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer’s disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology. Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).
- Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis. Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).
- Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review. J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).
- Yamada, M. Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts. J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).
- Oy, B. Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation. Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).
- Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery. J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).
- Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension. J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).
- Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain. Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).
- Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice. Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).
- Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O’Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite. Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).
- Badhwar, A. Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).
- Castro, L., Brito, M., et al. Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release. J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).
- Hübscher, D., Nikolaev, V. Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors. Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).
