Het grootbrengen de fruitvlieg<em> Drosophila melanogaster</em> Onder Axenische en gnotobiotische voorwaarden

De meeste dieren zijn nauw verbonden met bacteriën ( 'microbiota') vanaf de geboorte tot de dood ^1. Vergelijkingen van micro-organisme-vrij ( 'axenic') en micro-organisme geassocieerde ( 'conventionele') dieren hebben aangetoond microben invloed op diverse aspecten van de gezondheid van dieren, met inbegrip van metabole, nutritionele, bloedvaten, lever, respiratoire, immunologische, endocriene en neurologische functie ^2. De fruitvlieg Drosophila melanogaster is een belangrijk model voor het begrijpen van vele van deze processen in de aanwezigheid van microben ^3,4 en voor het bestuderen microbiota invloed diergezondheid ^5,6. Geen bacteriesoorten aanwezig in ieder individu ( 'core'), maar Acetobacter en Lactobacillus soorten numeriek domineren de microbiota van zowel laboratorium gekweekte en in het wild gevangen D. melanogaster. Andere Acetobacteraceae (inclusief Komagataeibacter en Gluconobacter), Firmicutes (zoals Enterococcus en Leuconostoc), en Enterobacteriaceae zijn ofwel vaak aanwezig in Drosophila personen bij lage overvloed, of onregelmatig aanwezig bij hoge overvloed ^7-12.

De microbiota van Drosophila en zoogdieren is wisselvallig binnen en tussen de generaties ^14,19. Microbiota wisselvalligheid kan leiden tot fenotypische lawaai bij het meten van microbiota-afhankelijke eigenschappen. Bijvoorbeeld, de Acetobacteraceae invloed lipide (triglyceride) opslag in Drosophila ^15-18. Als Acetobacteraceae meer overvloedig in vliegen van een flacon is dan in een andere ^19, kan isogene vliegen verschillende fenotypes ²⁰ hebben. Een oplossing voor het probleem van microbiota onbestendigheid bij muizen ¹⁴ is in de praktijk sinds de 1960's, door invoering van een bepaalde gemeenschap van 8 dominante microbiële soort muizen- pups elke nieuwe generatie (gewijzigde Schaedler flora),zodat elk pup wordt blootgesteld aan dezelfde belangrijke leden van de muis microbiota. Deze praktijk bedieningsorganen voor microbiota samenstelling zelfs wanneer de microbiota is niet het primaire doel van de studie ³² en stelt precedent de aanwezigheid van belangrijke microben in verschillende experimentele omstandigheden te waarborgen.

Om de invloed van microben op Drosophila voeding te bepalen, hebben een aantal protocollen voor het afleiden van axenic fly lijnen ontwikkeld, met inbegrip van chloorbleekloog dechorionation van embryo's (hetzij afgeleid de novo elke generatie of generationally onderhouden door overschrijving op steriele diëten) en behandeling met antibiotica ^13. Er zijn voordelen aan verschillende benaderingen, zoals gemak en snelheid voor beide antibiotica behandeling en seriële overdracht versus meer controle verstorende variabelen de novo dechorionation (bijvoorbeeld ei dichtheid resterende contaminerende microben, off-target antibiotische effecten). Ongeacht de wijze vanvoorbereiding, de introductie van bepaalde microbiële soorten embryo axenische maakt cultuur van Drosophila met gedefinieerde ( 'gnotobiotische') communities. Alternatief nabootsen het gebruik van Schaedler flora die gemeenschap kunnen worden geïnoculeerd conventioneel eitjes (volgende stappen 6-7) om de aanwezigheid van eigenschap beïnvloeden microben Elke flacon en ter voorkoming van complicaties van microbiota onbestendigheid. Hier beschrijven we het protocol voor het verhogen van axenic en gnotobiotische Drosophila door de novo dechorionation van embryo's, en voor het bevestigen van de aanwezigheid van ingevoerd of vervuilende microbiële taxa.