Interrupción Anti-virulenta de patógenos biopelículas utilizando Engineered Quórum para saciar lactonasas

Las opciones de tratamiento para las enfermedades infecciosas se han complicado por el rápido aumento de bacterias resistentes a múltiples fármacos que son inmunes a una amplia gama de fármacos antibióticos ^1. Con altas tasas de morbilidad y mortalidad por infecciones con bacterias resistentes mediadas, existe la necesidad de intensificar los procesos de desarrollo de fármacos y / o explorar mejores alternativas antibacterianos para mejorar las opciones terapéuticas. Últimamente, el enfoque anti-virulencia está ganando interés dado su potencial en la prevención de la virulencia través de métodos no bactericidas, por lo tanto, la mitigación de los riesgos de los mecanismos de resistencia ^2.

Quórum de detección es un "interruptor maestro" en la virulencia bacteriana y la interrupción de este fenómeno de señalización es un método anti-virulencia prometedora contra patogénesis ^3. El inicio de la virulencia requiere la acumulación de moléculas de quórum en el medio extracelular después de que se alcanza una densidad crítica población bacteriana. Como quomoléculas de ron difunden de nuevo en la matriz intracelular, la unión con sus receptores afines conduce a la activación de factores de virulencia, así como genes asociados con la resistencia a los antibióticos y la formación de biopelículas ^4. En, la interrupción del quórum de detección general, implica la inhibición de molécula de quórum y la interacción del receptor sin afectar las rutas metabólicas primarias. Por lo tanto, no tiene ninguna implicación directo sobre el crecimiento celular. Desde la aptitud no se vea comprometida, no hay presión de selección mínimos para las bacterias para evolucionar y ganar resistencia contra tales tratamientos ^5. Además, la interrupción de detección de quórum puede interferir con los mecanismos de protección bacterianas inherentes, como en el caso de la formación de biopelículas, que proporciona protección de los agentes anti-bacterianas y respuestas inmunes del huésped.

Se estima que el 99% de los microbios en la Tierra existe en matrices de biofilm como complejas, que confiere ventajas de supervivencia cruciales a los microorganismos que viven dentro de THestructuras ESE ^6. Más importante aún, la formación de estos dominios sésiles es la causa de las infecciones nosocomiales más persistentes y crónicas ^7. Acinetobacter baumannii es uno de los principales patógenos humanos que se asocia con infecciones globales adquiridas en el hospital y su virulencia se atribuye en gran parte al quórum de detección la formación de biopelículas mediada ^8. Enzimas-quorum quenching han utilizado con éxito en la interrupción de la transducción de señales mediada por-quórum dirigidas a un grupo de compuestos conocido como N-acil homoserina lactonas (AHL) que son producidas por bacterias Gram-negativas ^9. Varios estudios también han expandido en el uso de estas enzimas para bloquear la patogénesis bacteriana a través de la reducción de la expresión del factor de virulencia y el número de células en los biofilms ^10,11. Desafortunadamente, sigue existiendo una falta de demostración palpable de la utilización eficaz de las enzimas de quórum de extinción contra la formación de biofilm por patógenos bacterianos. losre ha habido intentos de utilizar inhibidores de quórum (análogos de AHL), en lugar de las enzimas de quórum de enfriamiento, para interrumpir A. la formación de biopelículas baumannii ^12. Aunque este método de uso de inhibidores de moléculas pequeñas es un enfoque válido, el mantenimiento de su biodisponibilidad en usos de traslación puede ser un desafío. Por el contrario, el uso de enzimas de quórum para saciar catalíticos podría eludir el problema biodisponibilidad como enzimas son más susceptibles a la inmovilización sobre superficies de dispositivos biomédicos para efectos terapéuticos.

Aquí se describe una evaluación de los efectos de lactonasas de quórum para saciar la ingeniería de Geobacillus kaustophilus (GKL) ¹³ en la formación de biopelículas bacterianas, mediante la tinción de cristal violeta y microscopía láser confocal de barrido (CLSM). Este estudio es la primera demostración con éxito de la interrupción del biofilm en un A. clínicamente relevante cepa baumannii S1 utilizando enzimas de quórum temple. Los métodos descritosen este estudio son útiles para evaluar la eficacia de otras enzimas de quórum para saciar en posteriores esfuerzos de desarrollo terapéuticas contra bacterias Gram-negativas patógenas.