Fare Koku Ayrımcılık ve alışkanlık için test
Summary
This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.
Abstract
This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal’s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning.
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.
Introduction
Fareler diğer bireylerin tanımak için, yiyecek bulma, yeni ortamlar seyrüsefer olfaction bağlıdır ve cinsel davranış 1-3. Bu araştırmacılar deney hayvanları yiyecek, sosyal etkileşim, ya da fare bir yanıt ortaya çıkarmak amacıyla herhangi bir koku içeren davranışsal testler uygulamadan önce koku işleyen duygusuna sahip olsun ya da olmasın kurmak esastır. Anozmi veya yetersizlik davranışsal paradigmaların çok çeşitli yanlış pozitif veya negatiflerin yol açabilir, farklı kokulara ayırt etmek, yani davranış testleri diğer türleri yapılmadan önce tespit ve kokuları ayırt etmek için bir farenin kabiliyeti kurulmalıdır.
koku alışkanlık / dishabituation testi ilk olarak 1980'li yıllarda 4 tarif edilmiştir. Test Dr farelerde kullanılmak üzere adapte edilmiştir. Mu Yang ve Jacqueline Crawley 5. Bu araştırmacı esta sağlayan basit ve ucuz bir testtirFare algılamak ve kokuları ayırt edebilir Blish. Koku alma test ek olarak, bu test araştırmacı fare genel davranışını gözlemlemek ve erken test rejiminde yapılmalıdır sağlar. Nitel farenin lokomosyon ilişkin gözlemleri, anksiyete belirtileri, aktivite düzeyi ve gıda kokuları karşı toplumsal kokulara tepki testi yapılabilir hangi yeni alanlara işaret ediyor olabilir.
Bu testte, çeşitli kokular daldırılır pamuklu bir satırda bir fare üç kez sunulmaktadır. Bir koku her tekrarlanan sunumu ile fare sonraki her bir sunum ile araştıran az zaman harcayarak, pamuklu çubukla alışmakta olacaktır. Yeni bir koku sunulduğunda, dishabituation oluşur ve tipik bir fare mevcut ve önceki kokuları 5 arasında ayrım olduğunu belirten çubukla araştıran daha fazla zaman geçireceksiniz. Bu test, her seferinde bir fareye uygulanan ve 45 dakika acc içerirlimation süresi test 45 dakika izledi.
Bu testi taşıması kolay olmasına rağmen, fare koku sistemi hakkında sofistike soruları araştırmak için kullanılabilir. Gömülü Gıda testi gibi koku alma diğer popüler testler, sadece anozmi varlığını veya yokluğunu tespit. Ancak, koku ayrımcılık ve alışkanlık testi araştırmacı fare kokuları algılamak için ancak farklı kokular ayırt edebilir yeteneğine sahip değil sadece belirlemenize olanak sağlar. alışkanlık ve dishabituation desen yeni mutantlar kokuları 6,7 arasında ayrım olduğunu belirlemek için kullanılır olmuştur. Şaşırtıcı bir çalışmada, Fadool ve arkadaşları normal farelere 8 daha çok benzer kokuları ayırt edebilir "süper smellers" Kv1.3 kanalının gen hedefli silme ile bu fareler vardır göstermek için kokuların kompleks karışımlarını kullanılır.
Yeni bir nakavt fare modelini incelerken o establis yararlıdırh temel duyu görevler için normal davranış varlığı. Bir test rejiminde erken Bittiğinde, koku ayrımcılık ve alışkanlık testi bir araştırmacı herhangi bir olağandışı davranışları gözlemlemek için fırsat verir. Bu gözlemler mutant özelliklerini karıştırıcı atfedilebilecek sonraki test yanlış pozitif veya negatif sonuçları önleyebilir. Araştırmacılar sosyal davranışı, temel koku işlevini doğrulamak için gereğini araştırmak devam ederken giderek daha önemli hale gelir. Mutant hatlarında koku alma duyusunu inceleyen yanı sıra, bu test gibi tüm koku uyaranlara karşı bir farmakolojik tedavi özellikle sosyal koku uyaranlara bir hayvanın tepkisi artar olmadığı gibi ya da tepki artarsa belirli soruları için kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu makalede yer alan sonuçlar fareler için en uygun olan. farelere yeni bir koku güçlü bir tepki göstermektedir, daha sonra hızlı bir şekilde alıştırarak. Bu yöntemde önemli safhalardan biri kokuların hazırlanmasıdır. Araştırmacı kirlenmesini önlemek için birbirinden kokuları izole etmek büyük özen gerekiyor. Başka bir önemli yönü pamuklu çubukla sunumudur. Fare ucu araştırabilir ama ucunda gözyaşı değil bu yüzden araştırmacı pamuk ucu en iyi yer giderilir gerekiyor. Testin öne…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work is supported by a Baylor University Research Council grant and by a research grant from the Epilepsy Foundation.
Materials
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
- Doty, R. L. Odor-guided behavior in mammals. Experientia. 42, 257-271 (1986).
- Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice. Horm Behav. 46, 247-256 (2004).
- Keverne, E. B. Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function. Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).
- Gregg, B., Thiessen, D. D. A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus. Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).
- Yang, M., Crawley, J. N. Simple behavioral assessment of mouse olfaction. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).
- Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior. PLoS ONE. 7, e49622 (2012).
- Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer’s disease mouse model. J Neurosci. 30, 505-514 (2010).
- Fadool, D. A., et al. Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces ‘Super-Smeller Mice’ with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics. Neuron. 41, 389-404 (2004).
- Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination. Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).
- Baum, M. J. Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference. Horm Behav. 55, 579-588 (2009).
- Ferguson, J. N., et al. Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene. Nat Genet. 25, 284-288 (2000).
- Yang, M., et al. Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain. Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).
- Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nat Methods. 11, 629-632 (2014).
