通过圆窗膜病毒介导的基因传递给鼠标内耳手术方法

基因治疗一直被建议作为对遗传性听力损失的潜在的治疗，但在这方面的成功一直难以实现^1。迄今为止，病毒介导的方法学都占优势由于相对难以接近耳蜗内靶向特定细胞类型的理论能力。两个腺病毒（AV）和腺相关病毒（AAV）也已用于耳蜗基因递送。自动增值服务是在耳蜗为若干原因是有利的。它们是复制缺陷型病毒，并且可以有效的转基因的分子转移到不同类型的细胞，包括神经元，为一些听力损失的原因的一个重要目标。 AAV进入细胞是通过特异性受体介导^2;因此，特定的血清型的选择必须是兼容的细胞类型，以被转导。自动增值服务可以有效地转染毛细胞³和掺入到宿主基因组中，导致稳定的，长期的TRA的表达nsgenic蛋白和该单元⁴的表型变化。而对于短期应用，例如毛细胞再生未必是有利的，长期表达是遗传缺陷稳定救援非常重要的。因为自动增值服务不与任何人疾病或感染相关的，并证明无耳毒性^5,6,7，它们是在基因治疗中的用途为听力损失⁸的遗传形式的理想候选。

转移外源遗传物质导入用病毒载体的哺乳动物内耳已经研究在过去十年中，并成为一个有前途的技术，用于治疗遗传和获得性形式的听力损失^9。耳蜗是潜在的基因治疗有几个原因的理想目标：1）它的体积小，就必须在有限的所需要的病毒量; 2）从它的其他器官系统的限制副作用相对隔离;及3）其流体填充腔促进病毒交付整个迷宫^{10，11,12,13,14，15。}

先天性耳聋的小鼠模型允许使用的研究方法很多监测系统的，可复制的方式内耳的发展。虽然鼠标耳蜗的小尺寸确实存在一些手术难度，鼠标作为遗传性听力损失的研究具有极其重要的模式，有几个实验优于其他品种^16。小鼠模型允许范围内通过遗传连锁分析，收集了详细的形态学观察，并模拟情景致病特点的评估;正因为如此，它们是很好的候选病毒介导的基因治疗。在小鼠中结合的技术进步的广泛的遗传研究已经使得有可能产生转基因小鼠在整个实验室^{17,18，19，20,21}的可重现方式。 FurthermorE，有两个获得性和遗传听力损失表型小鼠，使严格的测试，在这个动物模型^22，23,24存在众多的车型。因此，校正听力使用病毒介导的基因治疗在小鼠模型是在寻求一种治疗人类疾病的适当的第一步骤。

之前我们已经表明，缺乏的水泡谷氨酸转运体3（VGLUT3）转基因小鼠天生聋哑，由于缺乏谷氨酸释放的IHC带状突触^25。由于此突变不导致感觉毛细胞的初级变性，这些突变小鼠有潜在其中测试耳蜗基因治疗先天性听力损失的优良模型。

迄今为止，一些病毒递送技术耳蜗基因治疗已被描述，包括圆窗膜扩散，圆窗膜注射，并且经由内耳开窗递送。有强大的IAL优点和每种方法⁹的缺点。

这里，我们报告为通过圆窗膜（RWM）病毒介导的基因递送到VGLUT3 KO小鼠内耳的外科方法。在耳后RWM注射方法是微创具有优良的听证会保留，并且是比较快的。如我们先前发表的，在为了恢复听力在该小鼠模型中，源自于AAV2载体携带VGLUT3基因（AAV1-VGLUT3）引入这些耳聋小鼠的耳蜗在出生后第12天（P！@），导致听²⁶的恢复。听力在VGLUT3 KO小鼠经听性脑干反应（ABR）验证，而转基因蛋白的表达用免疫荧光（IF）的验证。这种方法因而表明病毒介导的基因疗法可以纠正一个遗传缺陷否则将导致耳聋。