Eine einfache Verhaltenstest zur Prüfung von Visual Function in<em> Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus laevis Kaulquappen schwimmen lieber auf der weißen Seite einer schwarz / weißen Tank. Dieses Verhalten wird von ihrer Vision geleitet. Basierend auf diesem Verhalten stellen wir eine einfache Test, um die visuelle Funktion der Kaulquappen zu testen.
Abstract
Die Messung der visuellen Funktion in den Kaulquappen der Frösche, Xenopus laevis, ermöglicht Screening für Blindheit in lebenden Tieren. Der optokinetische Reaktion ist eine Vision-basierte, reflexive Verhalten, das in allen getesteten Wirbeltieren beobachtet worden ist. Tadpole Augen sind klein, so wurde der Schwanz Flip Antwort als alternative Maßnahme, die einen geschulten Techniker, um die subtile Antwort aufzeichnen erfordert verwendet. Wir haben eine alternative Verhalten Assay basiert auf der Tatsache, dass Kaulquappen lieber auf der weißen Seite eines Tanks schwimmen, wenn sie in einem Behälter mit sowohl Schwarz-Weiß-Seiten angeordnet. Die hier vorgestellte Test ist eine kostengünstige, einfache Alternative, die eine Antwort, die leicht gemessen wird erstellt. Der Aufbau besteht aus einem Stativ, Webcam und verschachtelte Prüfung Tanks, in den meisten Labors Xenopus leicht verfügbar. Dieser Artikel enthält einen Film, die das Verhalten von Kaulquappen, vor und nach dem Durchtrennen des Sehnervs. Um die Funktion von einem Auge zu testen, sind wir auch Vertretreter Ergebnisse einer Kaulquappe, in dem jedes Auge unterzog Netzhaut Axotomie an aufeinander folgenden Tagen. Zukünftige Studien könnten eine automatisierte Version dieses Tests für die Prüfung der Vision von vielen Kaulquappen auf einmal zu entwickeln.
Introduction
Xenopus laevis wurden als Modellorganismus zur Augenbildung studieren verwendet. Die Augen entwickeln schnell wachsenden Zeit in weniger als einer Woche zum Testen Gene oder Wege, die einen Einfluss auf die visuelle Entwicklung und Funktion haben. Um visuelle Funktion zu testen, hat die optokinetischen und optomotorischen Reaktion im Zebrafisch und Xenopus Kaulquappen verwendet wurde, bzw. 1,2. Da die Augen von Xenopus Kaulquappen sind relativ kleiner als Zebrafisch, dieser Test erfordert den Einsatz von Spezialgeräten und geschultes Personal, um die subtilen tail-Flip und Blickbewegungsverhalten in Xenopus zu erkennen. Ein robusteres Verhalten in Xenopus ist die Vorliebe für das Schwimmen in einem Tank mit einem weißen Hintergrund, die hier 3 beschrieben wird. Beim Platzieren einer Kaulquappe in einem halb schwarz / halb-weißen Tank, die Pre-metamorphen Kaulquappe schnell schwimmt auf der weißen Seite des Tanks. Bislang hatten wir diesen Test, um festzustellen, ob pluripotenten Zellen abgeleitetenAugen waren funktionellen 4. Hier berichten wir über eine detaillierte Version dieses Assays, die verwendet werden können, um die visuelle Funktion premetamorphic Xenopus-Kaulquappen testen.
Dieser Test ist einfacher als der optomotorischen Reaktion Assay, da bedarf es nur einen montierten digitalen Camcorder, Digitalkamera-Software und Standard-Ausrüstung in den meisten Labors Xenopus gefunden. Darüber hinaus ist die aufgezeichnete Reaktion erfordert keine spezielle Ausbildung, um tally Ergebnisse. Unsere repräsentative Ergebnisse zeigen, dass die gleiche Gruppe von Kaulquappen, mit Doppelnetzhaut Axotomie unterzogen, schwimmen zufällig um den Tank. Wir haben auch die Verhaltens Assay-Ergebnisse aus einer repräsentativen Kaulquappe, die zeigt, wie ein Auge für die visuelle Reaktion getestet werden. Ein Arbeitsblatt aufgenommen wurde, so daß während des Tests erworben Zahlen eingesetzt und ausgewertet werden. Dieses Arbeitsblatt kann verwendet werden, um zu bestimmen, ob die getesteten Kaulquappen eine visuelle Antwort sein.
Protocol
Representative Results
Discussion
Wir berichten hier über eine einfache Vision geführte Verhaltenstest, die leicht in weniger als einer Woche durch minimal geschulte Laborpersonal durchgeführt werden können. Während andere Tests erfordern spezielle Ausrüstung und Know-how in das Verhalten der Tiere, ermöglicht dieser Test ein Schnelltest der visuellen Funktion zu bestimmen. Ein anderer Verhaltenstest, der Visual Avoidance Assay wurde entwickelt, um zu bestimmen, wie Tectum trägt zur visuellen Wahrnehmung in Xenopus 10. Dieser…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus den National Institutes of Health: EY015748, EY017964 (MEZ) und EY019517 (ASV). Diese Arbeit wurde von der Forschung unterstützt, um Blindheit gebundene Zuwendung an die Augenklinik und die Lions des Zentral New York verhindern. Wir möchten auch unseren Tiertechniker, Matthew Mellini, für seine hervorragende Betreuung der Tiere und für die Intensivierung in in diesem Video Star danken.
Materials
| 1/2-gal. Flex-Tank with Cover | eNasco | SB19271M | size: 5-3/8" x 7" x 3-3/4" |
| Black electrical tape | |||
| White tissue paper | |||
| Large Inoculating Turntable | VWR | 50809-022 | size: Dia 114.3 x H 76.2 mm (4 1/2 x 3") |
| Durasorb Underpad | VWR | 82004-836 | size: 43.2 x 60.1 cm (17 x 24") |
| Kim wipe | Krackeler Scientific, Inc. | 1945-34155-CS | |
| Standard Tripod | various | ||
| iSight camera or webcam | Apple | M8817LL/A | Good for larger tadpoles but small ones are difficult to see |
| Portable computer | Apple/PC | various | We used a 13" MacBook, 2 GHz Intel Core 2 Duo running MacOSX Lion 10.7.5 |
| MiniDV Handycam Camcorder | SONY | DCR-HC42 | Connected by firewire to the computer with a 6-conductor and 4-conductor alpha FireWire 400 |
| Handycam Station | SONY | DCRA-C121 | This can be used for connecting firewire to camera |
| QuickTime Player software | Quicktime | Version 10.1 | |
| 26 Gauge Needle (5/8" length) | VWR | BD305115 | |
| Dumont #5 Forceps Biology | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| Disposables | |||
| Gentamicin Sulfate [50 mg/ml] | Fisher Scientific | 17-528Z | Stored at room temperature |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer | Fisher Scientific | NC9644388 | |
| Instant Ocean | Doctors Foster and Smith | CD-116528 | Stock solution = 100 g/L stored at room temperature |
| Sodium phosphate dibasic | Sigma Aldrich | S0876 | Stock solution = 0.4 M stored at room temperature |
| Tricaine (Ethyl-3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Sigma Aldrich | A5040 | Stock solution = 10% stored at -20˚C |
| In vitro fertilized embryos | eNasco | LM00490MX | 100 embryos/unit |
References
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